环孢素A丙烯酸树脂L100纳米粒的研究 - 图文(9)

苏州大学硕士学位论文 第四章 环孢素A纳米粒小鼠组织分布研究

2520151055mAU210nm,8nm (1.00)25201510mAU210nm8nm (1.00)/6.555/11550400-5-5-10-10-150.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min-150.01.02.03.04.05.06.07.08.0min/8.081/54924

A .空白肝脏 B. 含有CyA和内标CyD的肝脏样品 A. blank liver B. liver sample contained CyA and internal standard CyD

图4-3肝脏HPLC色谱图

Fig4-3 HPLC Chromatograms of liver

mAU210nm,8nm (1.00)3040mAU210nm,8nm (1.00)/6.719/39340820301020010-100-20-10-30-20/8.286/1821470.02.55.07.510.012.5min0.01.02.03.04.05.06.07.08.0min

A .空白脾脏 B. 含有CyA和内标CyD的脾脏样品 A. blank spleen B. liver sample contained CyA and internal standard CyD

图4-4脾脏HPLC色谱图

Fig4-4 HPLC Chromatograms of spleen

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mAU210nm,8nm (1.00)2015105706050mAU210nm8nm (1.00)/6.523/2609544030020-5-10-15-20-250.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min100-10-20-300.01.02.03.04.05.06.0/8.029/2293607.08.0min

A .空白肺 B. 含有CyA和内标CyD的肺样品 A. blank lung B. lung sample contained CyA and internal standard CyD

图4-5肺HPLC色谱图

Fig4-5 HPLC Chromatograms of lung

mAU210nm,8nm (1.00)60504030302020101000-10-100.02.55.07.510.012.5min0.01.02.03.04.05.06.07.08.0minmAU60210nm,8nm (1.00)5040/6.671/398435/8.242/170836

A .空白肾 B. 含有CyA和内标CyD的肾样品 A. blank kidney B. kidney sample contained CyA and internal standard CyD

图4-6肾HPLC色谱图

Fig4-6 HPLC Chromatograms of kidney

4. 标准品溶液的配制 4.1 CyD内标母液的配制：

精密称取2.12mgCyD于100ml容量瓶中，甲醇定容，配制成21.2μg/ml的

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标准液，-4℃冰箱保存。 4.2 CyA标准母液的配制：

精密称取10.03mgCyA原药于100mL的容量瓶中，甲醇定容，配制成100.3μg/mL 的标准液于-4℃冰箱保存。 4.3 CyA系列工作液的配制：

精密吸取CyA标准母液0.05、0.1、0.5、1、2、4mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容稀释成浓度分别为0.5015、1.003、5.015、10.03、20.06、40.12μg/mL的系列工作液。 4.4 标准曲线的制备

精密吸取空白全血0.5mL，加入CyA系列工作液和CyD内标液各50μL，使成浓度依次为0.05015、0.1003、0.5015、1.003、2.006、4.012μg/mL的血样，或精密吸取空白组织液1mL，加入CyA系列工作液和CyD内标液各50μL，使成浓度依次为0.2508、0.5015、2.508、5.015、10.03、20.06μg/g的组织样品。按照―生物样品的处理方法‖项提取测定药物，以浓度对Ai（CyA与CyD的峰面积之比）作线性回归，得到线性方程，结果见下表4-1。

表4-1 全血及组织中药物的线性范围和线性方程

Tab4-1 The equation of the calibration curve and the liner range of drug in blood and tissues Sample blood heart liver spleen lung kidney

Linear range 0.05015～4.012μg/mL 0.2508～20.06μg/g 0.2508～20.06μg/g 0.2508～20.06μg/g 0.2508～20.06μg/g 0.2508～20.06μg/g

Equation of the calibration curve

Ai=0.8196C+0.0184 Ai=0.1806C-0.0531 Ai=0.2185C-0.055 Ai=0.1747C-0.045 Ai=0.1584 C-0.0239 Ai=0.1551C+0.0037

r 0.9999 0.9992 0.9986 0.9997 0.9991 0.9994

4.5 回收率及精密度实验 4.5.1提取回收率实验 4.5.1.1内标CyD提取回收率

取0.5mL空白全血或者1mL各空白组织匀浆液加入CyD内标溶液50μL，按照―生物样品的处理方法‖项处理样品，进样记录峰面积为A1，同时进样相同浓度未经处理的CyD内标溶液,记录峰面积为A2，按照下列公式计算提取回收率，结果见下表4-2。

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提取回收率（%）=

A1?100% A2表4-2 小鼠血及组织中CyD的提取回收率（n=3）

Tab 4-2 The extraction recoveries of CyD from blood and tissues in mice (n=3) Sample blood heart liver spleen lung kidney

1 66.97 97.72 72.86 89.63 96.42 91.51

2 77.98 99.81 73.78 89.47 93.58 90.73

3 81.02 100.8 72.36 92.96 101.8 89.84

Mean (%) 75.32±7.392 99.44±1.572 73.00±0.7203 90.69±1.970 97.27±4.175 90.69±0.8356

RSD (%) 9.814

1.581 0.9867 2.173 4.292 0.9214

4.5.1.2 药物CyA的提取回收率

取0.5mL空白全血或1mL各空白组织匀浆液，加入低、中、高三种浓度CyA标准液，涡旋混合，按照―生物样品的处理方法‖项处理样品，进样记录峰面积，同时进样相同浓度未经处理的CyA标准溶液,记录峰面积，按照提取回收率公式计算提取回收率，结果见下表4-3。

表4-3小鼠血及组织中CyA的提取回收率（n=3）

Tab 4-3 The extraction recoveries of CyA from blood and tissues of mice (n=3) Sample blood heart liver spleen lung kidney

Concentration(μg/mL)

0.5015 1.003 2.006 2.508 5.015 10.03 2.508 5.015 10.03 2.508 5.015 10.03 2.508 5.015 10.03 2.508 5.015 10.03

Recovery (%) 73.19±2.124 77.74±3.401 70.36±1.027 90.82±1.782 108.3±1.485 113.3±2.633 73.00±4.151 60.01±0.524 64.19±7.423 89.25±5.310 95.03±5.897 84.95±1.103 85.75±1.159 93.75±15.14 106.4±4.830 85.14±5.685 81.59±4.561 99.41±5.313

Mean (%)

73.76±3.723 104.1±11.80 65.73±6.631 89.74±5.058 95.30±10.41 88.71±9.432

RSD (%)

5.048 11.33 10.09 5.636 10.91 10.63

4.5.2 方法回收率及精密度实验

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按提取回收率试验方法制备相关浓度的提取样品，进样测定，考察标准曲线的方法回收率及日内、日间精密度，结果见下表4-4。由表4-4可见低、中、高三种浓度不同组织样品的平均回收率在89.67～97.75%之间，方法准确度较高，满足生物样品测定要求。低、中、高三种浓度不同组织匀浆样品的日内RSD＜10%，日间RSD＜15%，亦满足生物样品测定要求。

表4-4 测定小鼠血及组织中CyA的方法回收率和精密度

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