环孢素A丙烯酸树脂L100纳米粒的研究 - 图文(7)

苏州大学硕士学位论文 第二章 环孢素A纳米粒稳定性及冻干工艺的初步研究

表2-9 冻干纳米粒水复溶结果

Tab 2-9 The result of lyophilized CyA-L100-NP after dissolved by water NO. 1 2 3 4 5 Average

Aggregation Opalescence

1 0 1 1 0

++ +++ +++ ++ +++

Average particle size (nm) 93.43 87.87 94.37 110.7 92.84 95.84±8.68

PDI

value 0.211 0.272 0.361 0.328 0.359 0.306±0.064

Sore 25 31 24 22 28 26±3.54

2.5.3冻干品的粒径分布图

取上述冻干好的纳米粒,用适量蒸馏水复溶后,用Zetasizer 3000HS动态激光粒度分析仪测定其粒径及分布，结果见图2-2及2-3。

图2-2 冻干纳米粒的粒径分布

Fig 2-2 Size distribution of freeze-drying CyA-L100-NP

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图2-3 冻干纳米粒的粒径统计学分布

Fig2-3 Size distribution by statistics of freeze-drying CyA-L100-NP

§2.3讨论与小结

1.纳米粒溶液中粒子高度分散，具有较高表面自由能，属于热力学和动力学不稳定体系。在长期贮存过程中容易引起聚集沉淀。本文稳定性实验发现纳米粒溶液于40℃下放置一个月后粒径显著变化，并且随着时间的增加粒径越来越增大，其含量和包封率在两个月时间内没有显著变化，提示纳米粒溶液应在低温下保存。实验表明纳米粒溶液可以在4℃和25℃条件下稳定放置两个月，粒径、含量和包封率均没有显著变化。

2.为了提高纳米粒贮存稳定性，采用真空冷冻干燥法制备纳米粒冻干固体。在冷冻干燥过程中，冰晶的形成与生长以及升华均会破坏纳米粒，因而需要选择合适的支架剂来保护纳米粒。冻干保护剂多为多羟基糖类或多元醇类物质。多羟基类化合物在冷冻过程中能与水形成低共熔混合物或玻璃态物质，能抑制冰晶的生长，使冰晶以无定形或微晶的状态存在，从而降低了其对纳米粒的挤压和机械损伤作用。同时还可以降低由于冰晶形成所致的浓度局部增大。此外，还可通过羟基与纳米粒表面集团形成氢键，从而在脱水过程中代替水的作用，抑制纳米粒的聚集。冻干保护剂还可在干燥过程中起到支撑剂的作用，避免纳米粒的相互聚集。本文对纳米粒冻干工艺进行初步研究，最终选择2%的乳糖作为冻干保护剂。冻干后的纳米粒呈多孔白色絮状物，吸湿性强，可复溶为具有乳光的纳米粒溶液，平均粒径可＜100nm，但与冻干前相比，粒径显著增加，

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苏州大学硕士学位论文 第二章 环孢素A纳米粒稳定性及冻干工艺的初步研究

结果不太理想。因此，还需对冻干保护剂和冻干品制备工艺作进一步研究。 §2.4 总结

本文采用HPLC法测定了纳米粒溶液中CyA的含量，超速离心法测定其包封率，考察了温度对纳米粒稳定性的影响，结果表明纳米粒溶液在40℃下不稳定，放置一个月后，粒径显著增大，在4℃及25℃稳定。本文初步探讨了纳米粒真空冷冻干燥工艺，以2%的乳糖为保护，-70℃冰箱预冻12h后于真空冷冻干燥机内干燥24h，得到纳米粒冻干品，加水可复溶为100nm左右的纳米粒溶液。

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苏州大学硕士学位论文 第三章 环孢素A纳米粒体外释放实验

第三章 环孢素A纳米粒体外释放实验

对纳米粒体外释放药物规律的研究，有助于了解其释药机理和体内释药行为，为药物在体内的吸收提供一定的理论依据。本文以新山地明作为参比制剂，以自制纳米粒溶液为制剂组，考察两种制剂在不同PH值条件下的体外释药情况。

§3.1材料和仪器 1.材料

CyA-L100-NP胶体溶液（实验室自制）；新山地明（Lot：S0015A，诺华制药）；环孢素A（福建科瑞药业有限公司，批号 060801，纯度99.3%）；无水乙醇、磷酸二氢纳、磷酸氢二钠、磷酸、十二烷基硫酸钠、氢氧化钠均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；乙腈、甲醇（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司） 2.仪器

KQ-100DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；PB203-N电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；PSH-3TC 数显精密酸度计（上海天达仪器有限公司）；SHZ-82恒温振荡箱（金坛富华仪器有限公司），LC-10AT高效液相色谱仪（日本导津公司）；Optima Max 超速冷冻离心机(贝克曼库尔特有限公司)

§3.2方法与结果

一、 体外释放介质的选择：

环孢素A是由十一个氨基酸组成的环状多肽，难溶于水，为满足体外释放所需的漏槽条件，选择蒸馏水， 40%乙醇-水，0.1% SDS水溶液，0.25% SDS水溶液，0.5% SDS水溶液作为候选释放介质。

称取药物35mg，分别加入到20 mL的各候选释放介质中超声分散，置于37℃恒温振荡器，以100 r/min速度恒温振荡2h，溶液经0.22μm微孔滤膜过滤，HPLC法测定其中药物含量，计算药物溶解度，根据漏槽条件的要求，选择合适的释放

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苏州大学硕士学位论文 第三章 环孢素A纳米粒体外释放实验

介质。释放介质的溶解度如下表3-1所示。

表3-1 不同释放介质中CyA的溶解度

Tab3-1 Solubility of cycolsporin A in different mediums

NO. 1 2 3 4 5

Dissolution medium water

40% alcohol aqueous solution 0.1%SDS aqueous solution 0.25% SDS aqueous solution 0.5% SDS aqueous solution

Solubility（μg/mL）

1.73 1714.58 410.87 1527.23 1530.56

根据以上的测定结果，并结合药物释放的研究需要，0.1%的SDS水溶液即可满足释放漏槽条件，故最终选0.1%的SDS水溶液为释放介质。 二、纳米粒体外释放实验[24]

精密吸取CyA-L100-NP胶体溶液和Neoral溶液0.2mL（CyA：2.5mg/mL）分别置于25mL的pH为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.8、7.4的磷酸盐缓冲溶液（含0.1%SDS）中，放置于37℃，以100r/min速度振荡的恒温振荡箱中。振荡2h后，取适量释放介质在离心力250000×g，10℃条件下超速离心2h，分取上层清液，进样20?L，HPLC法分别测定上清液中的CyA含量。HPLC方法同第一章环孢素A含量测定方法。计算CyA的释放百分率，结果见下表3-2及图3-1：

表3-2 不同pH值下Neoral 和CyA-L100-NP的释放百分率（n=3）

Tab 3-2 The release rate of Neoral and CyA-L100-NP in different pH value（n=3）

Sample

pH 1.0

pH 2.0

pH 3.0

The release rate(%,mean±SD) pH 4.0

pH 5.0

pH 6.0

pH 6.8

pH 7.4

Neoral 82.12±3.56 92.24±1.05 92.90±1.17 90.70±1.41 96.77±2.28 98.31±0.71 91.67±3.92 93.15±0.96

CyA-L100-NP 49.39±0.42 49.84±0.94 49.90±3.16 54.94±2.11 56.60±2.44 60.60±2.29 64.26±2.08 67.42±0.42

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