环孢素A丙烯酸树脂L100纳米粒的研究 - 图文(8)

苏州大学硕士学位论文 第三章 环孢素A纳米粒体外释放实验

100908070605040302010001234pH56Release rate(%)NeoralCyA-L100-NP78

图3-1 Neoral和CyA-L100-NP在不同pH值缓冲液中的体外释放曲线

Fig 3-1 In vitro drug release profiles from Neoral and CyA-L100-NP in several PBS value

（0.1%SDS）(n=3)

从上述图表，可以看出Neoral 在不同pH值下释放量均在82%以上，差不多完全释放，pH值对其释放几乎没有影响。CyA-L100-NP的释放行为与Neoral不同，在低pH值下，纳米粒释药量几乎不变，释放百分率接近50%，随着pH值的升高，药物释放百分率逐渐增大，当pH≥6.0时，释药量均﹥60%。CyA-L100-NP总体释放量＜68%。与Neoral相比，CyA-L100-NP的释放表现出一定的pH依赖性，高pH值更有利于药物的释放。 §3.3讨论与小结

1. 环孢素A是由十一个氨基酸组成的环状多肽，是水难溶性药物，根据《2005版中国药典》附录XIX D，缓释、控释和迟释制剂释放介质指导原则，对难溶性药物不宜采用有机溶剂，可加少量表面活性剂（如十二烷基硫酸钠等），同时根据溶解度实验结果，最终选择0.1%SDS水溶液为释放介质，使用稀盐酸、磷酸、氢氧化钠和磷酸盐缓冲液来调节不同PH值。

2. 释放介质中若含有十二烷基硫酸钠，那么调节不同PH值所用的磷酸盐只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。配酸性缓冲液：pH＝1～4，应用磷酸二氢纳；配中性缓冲液：pH＝6～8，可用磷酸二氢纳和磷酸氢二钠两种磷酸盐的混合溶液，同时参照药典附录来配不同PH值的缓冲液，药典上没有的pH值缓冲液，采用pH计来配制。

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3. 为了考察纳米粒在胃部存不存在释放，根据胃排空速率，取释放后两小时的时间点。

4. 本文制备纳米粒所使用的材料是丙烯酸树脂Eudragit L100,其为阴离子型聚合物，由甲基丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯按1：1比例共聚而得。该材料溶于乙醇，不溶于水，乙醚，在丙酮中膨胀，它的溶解度与pH值有关，pH阈值在6.0以上。由体外释放实验可知，CyA-L100-NP在不同pH值条件下，药物释放率均＞49%，而载体材料Eudragit L100应该在pH6.0以上的水溶液中才能被溶解，因而，可以推测，药物有很大一部分吸附在纳米粒表面，通过扩散作用溶解于介质中。当pH≥6.0时，达到Eudragit L100的溶解阈值，载体材料逐渐被溶蚀，将内部药物释放出来，由体外释放曲线可知溶蚀速度较慢，在pH为7.4的高pH条件下释放量不超过68%。 §3.4总结

采用超速离心法进行体外释放实验，结果发现CyA-L100-NP体外释放行为与Neoral不同，有一定的pH值依赖性，药物释放率随着pH值的升高而增大。

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苏州大学硕士学位论文 第四章 环孢素A纳米粒小鼠组织分布研究

第四章 环孢素A纳米粒小鼠组织分布研究

纳米粒载药能够避免药物胃肠道的降解，提高药物靶向性，改变药物组织分布，降低药物毒副作用，提高药物生物利用度等。为了研究CyA-L100-NP在体内的吸收与分布情况，本实验以市售新山地明为对照， HPLC法测定小鼠灌胃给予CyA-L100-NP制剂和对照制剂后全血及各组织器官内CyA的含量，计算有关药动学参数，探讨CyA-L100-NP的生物利用度及靶向性。

§4.1实验材料与仪器 1.实验材料

环孢素A（CyA，批号：0608019（N），纯度>99.3%，福建科瑞药业有限公司）；Eudragit L100（德国R?hm 公司 ）；泊洛沙姆188（Poloxamer 188，P188，沈阳药大集琦药业有限责任公司）；新山地明（Sandimmun Neoral,批号：S0015A, 规格25mg/粒，诺华制药有限公司）；环孢素D（CyD,含量大于96.5%，福建科瑞药业有限公司）；乙醚（分析纯，南京化学试剂有限公司）；正己烷（色谱纯，沃凯，国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；肝素钠（批号：F20070404，国药集团化学试剂有限公司）；浓盐酸（昆山金城试剂厂）；氢氧化钠（中国试剂总厂）；偏重亚硫酸钠（上海凌峰化学试剂有限公司）；水系三蒸水。

2.主要实验仪器

HSC-24A型氮吹仪（HENGAO T＆D）；MS2型涡旋器（德国IKA公司）；低速大容量多管离心机（无锡市瑞江分析仪器有限公司）；KA-1000型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；FSH-Ⅱ型高速电动匀浆器（江苏金坛市环宇科学仪器厂）；SHZ-82型恒温振荡箱（金坛富华仪器有限公司），LC-20AD高效液相色谱仪（日本岛津公司）。 3.实验动物

昆明种小鼠，体重18-24g，♂，苏州大学医学院实验动物中心提供,清洁级[许可证号：SYXK（苏）2007-0035]。

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§4.2方法与结果[25-32]

一、RP-HPLC法分析CyA生物样品浓度方法的建立 1.生物样品的处理方法 1.1血及各器官组织预处理

小鼠摘眼球取血于肝素化的离心管中。断颈处死后将各器官（心，肝，脾，肺，肾）取出，称重，于-70℃冰箱中保存。分析时，将血于30℃水浴中孵化5min待测，组织加入10倍量三蒸水，组织匀浆器匀浆。 1.2血样处理方法

精密吸取0.5mL全血于15mL具塞塑料离心管中，加入21.2μg/mL内标液CyD50μL，加入180mmoL/L的盐酸溶液1mL，涡旋1min；加5mL乙醚，密塞，于恒温振荡箱中，100r/min，振荡15min，4000r/min，离心15min；吸取上层有色醚层于另一干净离心管中，加入1%偏重亚硫酸钠溶液2.5mL和95mmoL/L氢氧化钠溶液1mL，密塞，于恒温振荡箱中，100r/min，振荡15min,4000r/min,离心l5min；将无色醚层转移至5mL玻璃离心管中，于40℃水浴中氮气流吹干。残渣加入100μL的重组液（乙腈：水=70：30，v:v），涡旋2min，加入1mL正己烷，涡旋2min，3500r/min,离心10min；弃去上层液，再分别加1mL正己烷和0.5mL正己烷，各重复一次上述操作，最终吸取下层液20μL进样。 1.3组织样品处理方法

精密吸取1mL组织匀浆液于15mL具塞塑料离心管中，处理基本与血样操作相同，但是残渣用1mL正己烷洗涤2次后，再分别用0.5mL正己烷洗涤2次，最终吸取下层清夜20μL进样。 2.色谱条件

色谱柱：Phenomenex Luna C18 (2)（100R,250×4.6mm,5μ，广州菲罗门科学仪器有限公司)

流动相：乙腈：（甲醇：水）（1：1，v:v）=67：33（v:v） 流速：1.3mL/min 检测波长：210nm 柱温度：70℃ 3.色谱行为

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按照―生物样品的处理方法‖项处理各组织样品，进样后约在6.5min和8.1min出现两个色谱峰，其中，6.5min的色谱峰为CyA药物峰，8.1min的色谱峰为CyD内标峰，各组织匀浆液中物质基本不干扰药物CyA和内标CyD的测定，内标与各组织样品中CyA达基线分离。样品色谱图见图4-1至图4-6。

mAU40210nm,8nm (1.00)7530mAU210nm,8nm (1.00)/6.592/276204205010250 …… 此处隐藏：2331字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……