环孢素A丙烯酸树脂L100纳米粒的研究 - 图文(2)

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二、小鼠体内药物动力学及组织分布研究………………………………………35 1.样品的配制………………………………………………………………………35 1.1 对照组新山地明微乳溶液（Neoral）的配制………………………………35 1.2 制剂组环孢素A纳米粒溶液（CyA-L100-NP）的配制……………………35 2.实验方法…………………………………………………………………………35 2.1 分组及给药方法………………………………………………………………35 2.2取样方法及取样点的设计……………………………………………………35 3. 数据处理…………………………………………………………………………36 3.1含量测定结果……………………………………………………………………36 3.2 药物相对含量比较……………………………………………………………41 3.3单点横向比较…………………………………………………………………45 3.4.药动学解析……………………………………………………………………48 3.4.1 相对生物利用度的计算……………………………………………………48 3.4.2 房室模型拟合………………………………………………………………49 3.5 靶向性评价……………………………………………………………………52 §4.3讨论及小结……………………………………………………………………54 §4.4总结……………………………………………………………………………55 全文总结……………………………………………………………………………57 参考文献……………………………………………………………………………58 综述…………………………………………………………………………………61 综述参考文献………………………………………………………………………71 个人简历和发表文章………………………………………………………………75 致谢…………………………………………………………………………………76

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目的：优化环孢素A丙烯酸树脂L100纳米粒（CyA-L100-NP）的制备工艺，考察纳米粒溶液的放置稳定性,冷冻干燥技术及体外释放特性，研究其体内药物动力学和组织分布特性。

方法：以高分子材料丙烯酸树脂Eudragit L100为载体材料，以泊洛沙姆188（P188）为乳化剂，应用乳化-溶剂扩散技术制备环孢素A纳米粒，以纳米粒粒径、包封率和载药量等为综合指标， 均匀设计U7（76）优化处方工艺。动态激光散射法测定纳米粒的粒径分布，透射电镜观察纳米粒表面形态，X-衍射法观察纳米粒的物理特性。考察样品在4、25、40℃条件下放置两个月，粒径、含量和纳米粒包封率的稳定性。

考察2%、4%、6%的海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇作冻干保护剂对纳米粒的冻干保护作用，从中筛选出最佳冻干保护剂，确立冻干工艺并进行验证。以新山地明（Neoral）为对照制剂，研究纳米粒在pH1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.8、7.4含0.1%SDS的缓冲溶液中的释放情况，比较两种制剂释药差异。昆明种小鼠120只（♂）,按照CyA25mg/kg剂量灌胃给予Neoral和CyA-L100-NP溶液，于给药后0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12、24h，共10个时相点，小鼠摘眼球取血，取心、肝、脾、肺、肾组织研磨，匀浆，加入内标环孢素D（CyD）,液-液萃取法提取药物后，HPLC法测定含量。3P87程序拟合房室模型，梯形面积法计算药动学参数，并进行靶向性评价。

结果：纳米粒平均粒径为39.75?0.50nm,包封率为99.57?0.04%，回收率为92.21?2.06%，载药量为15.37?0.34%，通过电镜照片可知，纳米粒粒子小，呈圆形或椭圆形，分布均匀。由X-衍射图可知环孢素A被包裹于纳米粒中，不再显示药物峰。纳米粒溶液在4℃及25℃下可以稳定放置2个月，粒径、含量和包封率没有显著变化，在40℃时放置1个月后粒径显著增大，提示应避免高温放置。采用2%的乳糖作为冻干保护剂，冻干保护效果好，冻干复溶后可使纳米粒平均粒径控制在100nm左右。新山地明在各pH值条件下释放行为没有显著性差异，释药量均＞82%，环孢素A纳米粒药物释放量随pH值的增加而增加。Neoral和CyA-L100-NP在血液中的药动学行为均可用二室模型描述（权重为1）。与

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Neoral相比，CyA-L100-NP的相对生物利用度为118.3%。组织分布实验结果表明CyA-L100-NP没有显著靶向性，但改变了药物在体内的分布，相对提高了在 脾和肺中的分布，降低了肝和肾中的分布，从而推测有利于降低药物的肝毒性和肾毒性。

结论：本文系统优化纳米粒制备及冻干技术，获得相对稳定的纳米粒制备工艺，通过HPLC色谱条件及可靠的生物样品处理方法的建立，综合评价了小鼠口服纳米粒后的药动学和组织分布特性，为环孢素A纳米粒给药系统的开发和应用奠定了理论基础。

关键词：环孢素A Eudragit L100 纳米粒 均匀设计 冷冻干燥 体外释药 组织分布

M.S. Thesis of Soochow University Abstract

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Objective: The cyclosporine A-loaded Eudragit L100 nanoparticles (CyA-L100-NP) were prepared by optimal technological procedure, its stability of storage, freeze-drying technique and the characteristic of drug release in vitro were investigated. The pharmacokinetics and distribution characteristics were also studied.

Method: CyA-L100-NP were prepared by quasi-emulsion solvent diffusion technique，choosed Eudragit L100 as the carrier material and poloxamer 188 as the

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emulsifying agent . The uniform experimental design ﹝U（﹞ was applied to the 77）

optimization of the formulation based on the particle size, the drug loading and entrapped efficiency etc. CyA-L100-NP was analyzed by dynamic light scattering for the particle size, transmission electron microscopy for morphology and x-ray diffractometer for physical characteristics. CyA-L100-NP were stored under 4,25,40℃ during two months. The stability of the sample about the particle sizes , the content of CyA and the drug entrapped was investigated.

The cryoprotectants of 2%, 4% and 6% trehalose, sucrose , lactose ,glucose, sorbitol and mannitol were studied in freeze-drying test in order to evaluating the protection of nanoparticles. The best cryoprotectant was chosen and the freeze-drying technique was established. CyA-L100-NP or Neoral were dispersed into the phosphate buffer containing 0.1% SDS at different pH values such as 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 6.8, 7.4 respectively. The de …… 此处隐藏：4381字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……