环孢素A丙烯酸树脂L100纳米粒的研究 - 图文(4)

苏州大学硕士学位论文 第一章 环孢素A纳米粒的制备工艺

清液。进样20μL，HPLC法测定上清液中CyA的含量。 7.3 回收率、包封率、载药量的计算方法

回收率(%)=

c1?v?100% wc包封率(%)=

?c1?c2??v?100%

c1?v载药量(%)=

?c1?c2??vwz?100%

式中c1：纳米粒胶体续滤液中CyA的浓度；c2：上清液中游离CyA的浓度；v：续滤液体积；wc：CyA理论投药量；wz：载体材料理论投药量。 二、环孢素A纳米粒(CyA-L100-NP)制备工艺优化 1. 处方前药物环孢素A理化性质的研究[18] ? 分子式及分子量：C62H111N11O12；M=1202.63 ? 分子结构：

? 性状：为白色或类白色粉末；无臭。

? 溶解性：在甲醇、乙醇或乙腈中极易溶解，在乙酸乙酯中易溶，在丙酮或

乙醚中溶解，在水中几乎不溶，37℃时溶解度为1.73μg/mL（实验值）。 ? 油水分配系数：lgP=2.92（文献值）[19] ? 稳定性：避光保存。

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2. 单因素考察

2.1 乳化剂泊洛沙姆的含量

文献[5]报道，20～30℃的泊洛沙姆188水溶液中CyA的溶解度小于在纯水中的溶解度，因此本文在纳米粒的制备方法中应用泊洛沙姆188作为表面活性剂具有重要意义，不仅可以降低纳米粒的表面张力，增加其在胶体溶液中的稳定性，还具有提高CyA包封率的作用。实验中发现泊洛沙姆188的含量为0.1%-0.7%时，较为适宜，过大或过小均不利于纳米粒的形成。 2.2 载体材料的含量

在实验中固定药物的总量，预实验发现，随着载体量的增大，溶液的乳光越强，当载体在200～500mg范围内粒径分布均匀，纳米粒载药量大。 2.3 搅拌速度

通过预实验发现搅拌速度对粒径有一定影响，速度过小或过大，形成的纳米粒分布不均，固定搅拌速度在300～900r/min。 2.4 挥发时间

挥发时间过长，纳米粒粒径显著增大，胶体溶液颜色变深。时间过短，乙醇挥发不完全，实验中将其范围固定在3-6h。 2.5 温度

水浴温度过高，纳米粒粒径显著变大，溶液由浅蓝色变成乳白色，温度过低则不利于乙醇的挥发。预实验表明水浴温度在30～65℃为宜。 2.6油相与水相比例

油/水比例在1: 5－4: 5下形成的纳米粒数量多，粒径大小呈现正态分布。 2.7其他因素的影响

实验中还对注射器针头大小，注射速度进行了考察，发现注射针头越小，注射速度越快越匀速，所得纳米粒粒径越小，分布越均匀。 3. 环孢素A纳米粒(CyA-L100-NP)的制备方法

称取适量的药物环孢素A和载体材料Eugdragit L100于50mL小烧杯中，用无水乙醇溶解构成有机相，取泊洛沙姆P188适量溶解于水中构成水相。在室温条件下，将有机相快速注入以恒定速率搅拌的水相中，注射完毕，继续搅拌10min，然后转移至水浴中挥发乙醇，所得溶液即为CyA-L100-NP胶体溶液。

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4. 均匀设计实验及处方的优化 4.1 均匀设计

根据预实验及单因素实验，确定影响CyA-L100-NP粒径及包封率等的主要因素有六个，分别为乳化剂泊洛沙姆P188的含量（X1），载体材料的含量（X2），搅拌速度（X3），挥发时间（X4），温度（X5），油水比例（X6）。按照均匀设计原理选择U7（76）均匀设计表安排实验，具体见下表Tab1-4, Tab 1-5。

表1-4 因素与水平

Tab1-4 Factors and levels

Factors

1

X1(%) X2(mg) X3(rpm) X4(h) X5(℃) X6(O:W,v:v)

表1-5 均匀设计U7(76)表 Tab1-5 Uniform design U7(76) No. 1 2 3 4 5 6 7

A 125 188 250 313 375 438 500

B 250 350 450 200 300 400 500

factors C 500 800 400 700 300 600 900

D 4.5 3 5 3.5 5.5 4 6

E 55 45 35 60 50 40 65

F 87.5:125 75:125 62.5:125 50:125 37.5:125 25:125 100:125

0.1 350 350 3 35 1:5

2 0.2 400 400 3.5 40 1.5:5

3 0.3 450 450 4 45 2: 5

Levels 4 0.4 500 500 4.5 50 2.5:5

5 0.5 550 550 5 55 3:5

6 0.6 600 600 5.5 60 3.5:5

7 0.7 650 650 6 65 4:5

4.2结果评价

以不同处方所得粒径，主峰百分比，回收率，包封率和载药量五个指标进行综合评分，采用多指标公式评分法处理数据。评分标准：总分为100分，粒径指标权重为0.4，以40nm为满分，小于40nm的均为满分,大于40nm的,每比40nm多20nm,相应减去1分；主峰百分比权重为0.1，以100%为满分；回收率权重为0.2，以100%为满分；包封率权重为0.2，以100%为满分；载药量权重为0.1，以20%为满分。综合得分见表1-6。

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苏州大学硕士学位论文 第一章 环孢素A纳米粒的制备工艺

表1-6 综合评分 Tab1-6 Comprehend score

Formula NO.

Mean Percentage partical size of main (nm) peak

(%) 214.93 93.82 71.68 39.81 46.21 61.19 626.9

97.33 100 99.33 86.33 95.33 80.67 67.67

Yield (%)

Entrapped efficiency (%) 99.54 98.67 98.61 98.56 99.48 99.24 99.64

Loading (%)

Comprehend

score

1 2 3 4 5 6 7

91.18 92.8 93.9 74.42 89.16 86.16 73.17 18.24 13.26 10.43 18.60 14.86 10.77 7.32 88.25 92.23 92.07 92.53 94.38 89.47 55.64

4.3 数据处理

将上述数据代入医学统计学程序（PEMS）程序作回归，得到下列线性方程：

Y=134.6339-89.1335X1-10.1676X6

复相关系数R=0.994，剩余标准差S=1.686，回归方差与剩余方差之比为F0=169.329，F0.05(2,4)=8.944272，方程显著,优化结果为：X1=0.1%；X6=1:5，其它因素无明显影响。 4.4最佳处方

根据试验条件和计算机软件统计结论，结合粒径和外观形态，并通过对其余因素的进一步比较，最后确定最佳的处方工艺为：F68：125mg；载体量：300mg；搅拌时间：3.0h；温度：60℃；搅拌速度：400rpm；油相：水相＝1: 5（v/v）。 4.5 验证实验

将最佳处方重复三份，结果见表1-7。由表可知，处方重复稳定，所得纳米粒粒径小，包封率高，达到了优化的目的。

表1-7 重复最佳处方

Tab 1-7 Repeat of the best formula

No.

Mean Percentage partical size of main (nm) peak

(%) 39.18 39.99 40.08 39.75?0.50

100 100 100 100

Yield

(%) Entrapped efficiency

(%)

Loading (%) Comprehend

score

1 2 3 ?x?SD

90.01 92.55 94.08 92.21?2.06

99.62 99.56 99.54 99.57?0.04

15.00 15.42 15.68 15.37?0.34

95.43 96.14 96.56 96.04?0.57

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苏州大学硕士学位论文 第一章 环孢素A纳米粒的制备工艺

三、环孢素A纳米粒的理化性质 1. 环孢素A纳米粒的形态特征

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