系统性红斑狼疮(6)

第一章 前言

阻碍Th17的分化。mDC与核小体、凋亡小泡共培养，mDC分化成熟，而且会产生高浓度的IL-6。另外我们发现，由凋亡小泡刺激成熟的DC和异体淋巴细胞混合培养时，会促进脾细胞产生IL-17[50]。

总结：在SLE中，异常细胞凋亡和未被有效清除的凋亡物质会导致凋亡核小体和凋亡小泡等物质。这些物质被mDC摄取，使其成为成熟的mDC。成熟的mDC表达一些共刺激分子并且分泌一些细胞因子如IL-6。IL-6抑制了Treg的分化和功能，IL-6和TGF-β促进了TH17的分化，一些细胞因子同时也促进了Th亚群Th1、Th2的分化。分化的Th细胞辅助B细胞的活化，产生自身抗体。自身抗体和凋亡物质形成复合物，pDC就可以摄取复合物并产生大量的I IFN（主要是IFN-α），IFN-α有助于自身抗体的产生和抗体亚型的转换，起到一个放大作用。复合物可以和多器官的基底膜结合，造成炎症反应，形成不同的临床症状，例如肾小球肾炎。而这些组织损伤又会造成更多的细胞凋亡，从而形成一个正反馈。（图1.8）

图1.8 DC细胞在系统性红斑狼疮中的作用

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第一章 前言

1.2.4 T细胞与系统性红斑狼疮（图1.9）

本实验研究T细胞的分化分为三个时期。在分化早期，T细胞既不表达CD4也不表达CD8的双阴性细胞；随着在胸腺内的分化成熟，T细胞既表达CD4也表达CD8的双阳性细胞，最后经过二次选择成为表达CD4或者CD8的单阳性细胞。T细胞可以分为CD4 +T细胞和CD8 +T细胞，CD8+T细胞为细胞毒性T细胞，CD4+T细胞为辅助性T细胞，CD4+T又可以根据细胞因子的不同分化成不同亚型。

CD8 +T细胞和双阴性细胞：在SLE病人中CD8+T细胞数量增多[68]，敲除CD8+T细胞会导致SLE[69]。同时在SLE病人中双阴性细胞扩增，这些双阴性细胞可能是由CD8+T受到抗-CD3-TCR 自身抗体和抗原刺激后脱去CD8分子产生的。这些双阴性细胞可以浸润靶器官，导致炎症反应，促进B细胞产生抗体[66]。

Th1和Th2细胞： Th1主要分泌IFN-γ、IL-2、TGF-β，主要参与细胞免疫，。Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10，主要参与体液免疫。在SLE中由于细胞因子分泌异常导致Th1和Th2细胞平衡异常。部分研究发现在SLE病人中Th1分泌的细胞因子显著增高，而也有研究发现发现SLE中Th2分泌的细胞因子显著增高，更有研究发现Th1 、Th2 型细胞因子水平均升高。或许在SLE中Th1 、Th2处于动态变化中。

Th17细胞：Th17是新发现的一类辅助性T细胞，TGF-β、IL-6 或者 IL-21有助于Th17的分化，它可以产生细胞因子IL-17A, IL-17F, IL-21, and IL-22，表达转录因子RORγt、RORα。有大量报道发现在SLE中，Th17细胞增多，血清中IL-17增多[67,70,71]。

TFH 细胞：滤泡辅助性T细胞是由 Schaerli和 Breitfeld在2000年几乎同时发现的一类新型CD4、CXCR5 双阳性辅助性T细。这类细胞位于淋巴结滤泡中，在CXCR13 的趋化下被募集到淋巴滤泡并与B细胞共定位和相互作用，并同时高表达 ICOS 、Bcl-6 、CD40L和PD -1 ，分泌IL-21，刺激B 细胞的增殖成熟和诱导免疫球蛋白类别转换。Tfh 细胞能促使生发中心（GC ）中缺乏自身反应性 、具有抗原高亲和力的B细胞分化为高亲和力的浆细胞和对感染起长期保护作用的记忆性 B 细胞 ，在促进 GC 的形成 、维持长时间的体液免疫应答等方面也发挥关键性的作用。在SLE患者的外周血中，CD4+CXCR5+双阳性细胞数量增加，其表型类似于Tfh 细胞，高表达T细胞共刺激分子ICOS和

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第一章 前言

程序性死亡分子PD-1[72]。同时在易患SLE的小鼠中，疾病的发展伴随着Tfh 细胞细胞数量的增多，并且发现了滤泡外辅助性T细胞（在自体免疫的小鼠滤泡外生发中心中发现的一类类似细胞）[73]。另外，引进妨碍Tfh 细胞和滤泡外辅助性T细胞的基因缺陷，对小鼠患SLE具有保护作用[74]。IL-21受体缺陷的小鼠不易患SLE[75]，而在SLE患者的血清中也发现了高表达的IL-21[76]。

图1.9 T细胞在系统性红斑狼疮中的作用

第三节 本实验研究

1.3.1 研究目的和意义

系统性红斑狼疮是一种多系统自身免疫疾病，可累及全身各个器官，严重危害人类的生命健康和生活质量。由于其病理机制非常复杂，至今未被阐明。现在对于系统性红斑狼疮的治疗主要是一些免疫抑制药物，但是这些药物具有明显的副作用，且不能从根本上治愈疾病。本实验通过小鼠系统性红斑狼疮模型的构建，研究其IL-6在系统性红斑狼疮中的致病机理，为开发IL-6及其受体的药物治疗系统性红斑狼疮具有重要作用。

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第一章 前言

1.3.2 研究方法和内容

本实验首先用建立了一个小鼠SLE模型：用ConA在体外刺激小鼠脾脏细胞7天，提取ALD-DNA。然后用ALD-DNA免疫小鼠建立SLE模型，具体表现为血清中dsDNA抗体含量增多、尿蛋白含量增多、肾脏病理切片损伤加重。其次，我们发现IL-6敲除的老鼠用ALD-DNA免疫后不易患SLE，这证明IL-6在SLE中可能起到促进疾病的作用。在体内，我们用ELISA检测ALD-DNA免疫小鼠的血清，发现大量IL-6、dsDNA抗体 。在体外，我们用ALD-DNA刺激小鼠脾脏细胞，ELISA检测发现上清中含有大量的IL-6、dsDNA抗体、IL-17和 TNF-a。这进一步说明了ALD-DNA可以介导IL-6的产生，因而在SLE中发挥作用。然后我们研究了IL-6在小鼠SLE中可能影响的细胞是Treg和CD4+T细胞，IL-6抑制了Treg的分化，而且促进了CD4+T细胞的活化。我们用流失细胞分析仪检测ALD-DNA免疫的小鼠脾脏和淋巴结细胞，发现Treg的含量减少，而活化的CD4+T细胞的数量增加。最后，我们研究了在小鼠SLE模型中，IL-6细胞的来源一部分是DC细胞。我们取小鼠的骨髓细胞进行DC细胞的分化培养，然后用ALD-DNA刺激培养1天，ELISA检测上清发现了大量的IL-6和 TNF-a。随后我们用这个上清做小鼠脾脏淋巴细胞向Treg的分化培养，流式细胞分析发现Treg的数量减少。这证明IL-6和/或TNF-a 可以抑制Treg的分化。随后我们用抗体分别阻断IL-6和TNF-a，发现阻断IL-6可以部分缓解对Treg的抑制，而阻断TNF-a对Treg的分化产生微小影响。最终我们得出结论，在ALD-DNA免疫建立的小鼠SLE模型中，DC分泌大量的IL-6，IL-6可以抑制Treg的表达，从而对SLE具有促进作用。

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第二章 实验材料很方法

第二章 实验材料和方法

第一节 实验材料

2.1.1 实验小鼠

6-8周B6雌性野生型小鼠从军事医学科学院（北京，中国）研究院购，IL-6KO小鼠购自Jackson实验室（缅因州巴港）购买。在我们的实验中使用的所有小鼠均为雌性。所有动物保持控制温度和湿度下的无特定病原体（SPF）的条件下进行（恒温24~26℃，恒湿45~55%，置于层流超净架内，12h光照和12h黑暗交替，自由进食SPF级颗粒饲料及饮水）。所有动物的饲养按照医学实验室动物护理和使用（卫生部，中国）和南开大学生命科学学院机构动物护理和使用委员会条例执行。（恒温24~26℃，恒湿45~55%，置于层流超净架内，12h光照和12h黑暗交替，自由进食SPF级颗粒饲料及饮水）。

2.1.2 实验试剂

RPMI-1640：Hyclone laboratories ,logon,UT FBS：Gibco,Renfrewshire,UK 红细胞裂解液：Sigma-Aldrich ConA： Sigma (St. Louis, MO) PBS：Solarbio

Tween20：Sigma-Aldrich 弗式完全佐剂（CFA）、弗式不完全佐剂（IFA）：Dingguo Co.,Beijing 0.5%的硫酸鱼精蛋白：Sigma-Aldrich

S1核酸酶处理后的小牛胸 …… 此处隐藏：2295字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……