本科毕业论文答辩最终定稿—吴威 - 图文(7)

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注：左图为紫拟青霉紫色色素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果（双层滤纸/20 μL）；右图的右上角为

庆大霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果；右图的左上角为青霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果；下面为添加无菌蒸馏水的空白对照。

图2.3 色素液与庆大霉素及青霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比较

Fig.2.3:The compare of antibacterial activity of the pigment solution, gentamicin and penicillin to Staphyloccocus aureus

培养12 h后对各抑菌圈进行十字交叉法测量其直径，如图2.3。试验结果得知：相同剂量（20 μL）条件下测得色素液（0.5 g/50 mL）的抑菌圈平均直径为2.09 cm，青霉素（2 mL/80万单位）的抑菌圈平均直径为2.48 cm，庆大霉素（2 mL/8万单位）的抑菌圈平均直径3.50 cm。表明：以抑菌圈直径为指标，在同等剂量下，色素液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好，其抑菌效果是庆大霉素的59.7 %，是青霉素的84.3 %。 2.1.3 小结

紫拟青霉色素水溶液的抑菌试验结果表明，以抑菌圈直径为指标，该色素水溶液对金黄色葡萄球菌有很好的抑制效果，对青霉菌及黑曲霉无明显抑制作用；通过抑菌效果比较得知，在同等剂量（20 μL）下，浓度为0.5 g/50 mL色素水溶液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果是2 mL/8万单位的庆大霉素的59.7 %，是2 mL/8万单位青霉素的84.3 %。 2.2 抗氧化性 2.2.1 材料与方法 2.2.1.1材料

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（1）菌株：紫拟青霉，来自贵州大学真菌资源研究所。 （2）仪器：紫外分光光度计，岛津UV2450型。 （3）药品试剂：邻二氮菲、双氧水等为国产分析纯。 2.2.1.2方法

（1）色素粗提液对HO·的清除作用[27, 28, 29]

7.5 mmol/L邻二氮菲1.5 mL，加pH7.4磷酸盐缓冲液5 mL，充分混匀后，

加7.5 mmol/L 的硫酸亚铁1.5 mL，每加一管立即混匀。加0.10 % H2O2 2.0 mL，加水至12.0 mL，25 ℃水浴加热1 h后，测510 nm处的吸光度为A损伤。加色素样品液（浓度为0.2 g/100 mL）后再加0.10 % H2O2 2.0 mL，测吸光度为A加样。加Vc溶液后，再加2.0 mL 0.1% H2O2 测得吸光度值为AVc。不加H2O2和样品液测得的吸光度为A空白。利用以下公式求样品对HO·的清除率。 HO·清除率=[（A加样-A损伤）/（A空白-A损伤）]×100% （2）色素粗提液对DPPH的清除作用

在0.25 mmol/mL DPPH溶液中加入2 mL待测样品后摇匀，于室温下放置30min，用无水乙醇作参比液在517nm处测其吸光度为Ai；同时测定在2 mL，0.25 mmol/mL DPPH溶液中加入2 mL无水乙醇混合液的吸光度Ac；测定2 mL, 25 mmol/mL DPPH溶液中加入2mLVc液的吸光度值AiVc；再测定2 mL样品液与2 mL无水乙醇混合液的吸光度Aj。利用以下的公式求得样品对DPPH的抑制率，抑制率越高说明抗氧化活性越强。

DPPH的抑制率=[1-（Ai-Aj）/Ac）]×100% 2.2.2结果与分析

2.2.2.1 HO·的清除作用

用岛津紫外分光光度计

UV2450在510 nm下分别对A加样、A损伤、A空白的

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吸光度进行测定，取其平均值并计算抑制率（VC作对照），如表2.2：

表2.2 色素液对HO·的清除作用 Table 2.2: The scavenging effect of HO·

实验组 A加样 A损伤 A空白 A vc

OD值 0.270 0.252 0.475 0.483

由表2.2可知，通过公式：HO·清除率=[（A加样-A损伤）（/A空白-A损伤）]×100%计算可得该色素溶液对羟基自由基的清除率为8.0 %，对照组VC的清除率为100 %，色素液为VC清除率的8%。 2.2.2.2 DPPH的抑制率

用紫外分光光度计岛津UV2450在517 nm下分别对Ai、Aj、Ac的吸光度进行测定，取其平均值并计算抑制率（VC作对照），结果如表2.3：

表2.3 对DPPH的抑制作用

Table 2.3: The inhibition effect of DPPH

实验组 Ai Aj Ac A vc

OD值 1.321 0.091 1.492 0.558

由表2.3可知，通过公式：DPPH的抑制率=[1-（Ai-Aj）/Ac）]×100 %计算可知该色素水溶液对DPPH的抑制率为17.614 %，对照组VC的清除率为65.875 %，色素液为VC清除率的26.7%。

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2.2.3小结

紫拟青霉色素粗提液清除羟基自由基和DPPH试验，结果表明：该色素液对羟基自由基的清除率为8 %，对DPPH的清除率为17.614 %。与VC作比较可知该色素液对羟基自由基的清除效果是VC的8%，对DPPH的清除效果是VC的26.7%，表明该色素液具有一定的抗氧化效果。 2.3对部分癌细胞的抑制作用 2.3.1 材料与方法 2.3.1.1 材料

（1）菌株：紫拟青霉，来自贵州大学真菌资源研究所。 （2）仪器：紫外分光光度计，岛津UV2450型。 （3）药品试剂：Na2HPO4等为国产分析纯。 2.3.1.2 方法 （1）PBS溶液配制

定量称取NaCL0.8 g，KCL0.02 g，Na2HPO4 0.144 g，KH2PO4 0.024 g溶解于100 mL蒸馏水中，调pH至7.4。 （2）MTT溶液配制

定量称取0.5 gMTT，溶于100 mL PBS溶液中配成浓度为5 mg/mL的MTT溶液，用0.22 μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4 ℃避光保存待用。 （3）操作步骤

1）称取50 mg样品（紫拟青霉色素浓缩物），用DMSO溶液溶解至1 mL，此时溶液浓度为50 mg/mL，-20 ℃保存待用。

2）细胞铺板（96孔板），贴壁细胞每孔约3×104个，悬浮细胞每孔约5×104

个，贴壁细胞等贴上后加药，悬浮细胞立即加药，设置对照：全培养基、全

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细胞悬液（200 μL）、细胞悬液（190 μL）+DMSO（10 μL）、细胞悬液（190 mL）+药物（10 μL）。

3）加药(样品)，加药前DMSO，药物样品却用无血清培养基稀释200倍，即1 μL+199 μL，稀释完之后，再取10 μL加入到细胞悬液中，其终浓度为12.5 μg/mL，注意每个药物设置3个重复。

4）培养72 h<37 ℃，5 %恒CO2细胞培养箱之后，避光向每孔中加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL，即0.5 %MTT，用PBS溶MTT试剂），4小时之后，倒板，将液体倒出，千万不要碰到紫色的甲臜(三苯基甲臜)，再加入150 μL DMSO溶液到每孔，使其溶解甲臜。

5）检测:振板10 min，使甲臜充分溶解，再用酶标仪在490 nm处检测吸光度。

2.3.2 结果与分析

通过MTT法，测定色素对癌细胞系MDA（人乳腺癌细胞系）、BPH（良性前列腺癌细胞系）、PC3（前列腺癌细胞系）和K562（人慢性髓原白血病癌细胞系）的抑制作用，结果如表2.4：

表2.4 色素对MDA、BPH、PC3和K562四种癌细胞系的抑制率 Table 2.4: the inhibition rate of the pigment on MDA, BPH, PC3 and K562

癌细胞系 抑制率

MDA 19%

BPH 27%

PC3 19%

K562 30%

由表2.4可知紫拟 …… 此处隐藏：1687字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……