本科毕业论文答辩最终定稿—吴威 - 图文(6)

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贵州师范学院毕业论文（设计）

细菌培养液：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCL5 g，水1000 mL，pH 7.0-7.2。121 ℃灭菌30 min。

（2）色素粗提浓缩物的制备

将紫拟青霉接种于PDA液体培养基中，摇瓶培养4-6天，再静置避光培养20天，之后转自然光培养10天，将液面菌丝取出，用无水乙醇浸提3 h，收集提取液用旋转蒸发仪蒸干，得色素粗提浓缩物。 （3）细菌菌悬液制备

待供试菌种活化后，从斜面培养基上刮下适量菌体，接种于细菌培养液中，37 ℃培养18 h，培养后的菌液用血球计数板计数，以细菌培养液调整细菌浓度至3.2x108个/ mL，制成细菌菌悬液。 （4）色素粗提液的制备

准确称取0.5 g粗提浓缩物两份，其中一份完全溶于50 mL无菌蒸馏水中，无菌条件下静置，待用；另外一份置于温度为121 ℃，压强为0.14 MPa的立式压力蒸汽灭菌锅中灭菌20 min后取出冷至常温待用。 （5）抑菌材料制作

取3张定性滤纸为一叠，用打孔器均匀打孔，得到直径为6 mm的滤纸柱，压平后分装入洁净培养皿中，121 ℃灭菌30 min，放入烘箱烘干，待用。 试验步骤

（1）色素粗提液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌试验

1）取已灭菌干燥的培养皿，每个培养皿导入约20 mL的牛肉膏蛋白胨固体培养基，无菌条件下静置待其凝透，取培养基均匀并表面无冷凝水的使用。用灭菌干燥的棉签蘸取细菌菌悬液在培养基上均匀涂布，静置30 min至菌液完全吸收。

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2）用洁净无菌的镊子夹取滤纸柱（6层滤纸）在紫拟青霉粗提浓缩物水溶液中浸泡约10 s，取出滴去表面过多的色素液并将滤纸柱平移到培养基上。每个平板每种材料设对照1个（无菌蒸馏水），供试液2个，共3个。各种材料间隔距离相等，3个重复。

3）将上述平板静置于常温无菌环境中，待液体充分浸到培养基中，37 ℃培养24 h，观察并记录抑菌圈直径大小，测量采用十字交叉法，取其平均值。 （2）色素粗提液对青霉菌及黑曲霉的抑菌活性

取已灭菌干燥的培养皿，每个培养皿导入约20 mL的PDA固体培养基，无菌条件下静置待其凝透，取培养基均匀并表面无冷凝水的使用。将青霉和黑曲霉接种于平皿上均匀涂布，静置一会后用洁净无菌的镊子夹取滤纸柱（6层滤纸）在紫拟青霉粗提浓缩物水溶液中浸泡约10 s，取出滴去表面过多的色素液并将滤纸柱平移到培养基上。每个平板每种材料设对照1个（无菌蒸馏水），供试液2个，共3个。各种材料间隔距离相等，3个重复。 （3）色素粗提液、庆大霉素及青霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比较 取4个滤纸柱（每个滤纸柱两片滤纸），平移到涂好金黄色葡萄球菌的牛肉膏蛋白胨培养基上的4个不同位置。用移液枪各吸取20 μL的庆大霉素（浓度为2 mL/8万单位）、青霉素（浓度为2 mL/80万单位）、色素液（浓度为0.5 g/50 mL无菌蒸馏水）及无菌蒸馏水分别加到4个滤纸柱上。每个平板每种材料设对照1个（无菌蒸馏水），供试液3个，共4个。各种材料间隔距离相等，3个重复。 2.1.2结果与分析

（1）色素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌试验

通过对抑菌圈直径的测量考察色素液的抑菌效果，如表

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2.1，图2.1：

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表2.1 抑菌圈直径的测量

Table 2.1: The measure of inhibition zone

菌种 抑菌圈直径

大肠杆菌/mm

6.67

金黄色葡萄球菌/mm

23.2

图2.1 色素液对培养24h后的金黄色葡萄球菌（左）和大肠杆菌（右）的抑菌效果

Fig.2.1: The antibacterial activity of the pigment solution to Staphyloccocus aureus and Escherichia coli

由试验结果得知，在培养24 h后，浓度为0.5 g/50 mL的色素溶液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为23.2 mm，对大肠杆菌的抑菌圈平均直径为6.67 mm，表明该色素水溶液对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌效果，对大肠杆菌则无抑制作用（空白对照组直径为6 mm）。 （2）色素对青霉菌及黑曲霉的抑菌试验

图2.2 色素液对培养48h后的青霉菌（左）和黑曲霉（右）的抑菌效果

Fig.2.2: The antibacterial activity of the pigment solution to Penicillium and Aspergillus niger

由图2.2可知，在培养48 h后青霉菌、黑曲霉均已长满PDA培养基，未

出现抑制效果，表明色素液对青霉菌、黑曲霉没有抑制作用。

（3）色素液、庆大霉素及青霉素的抑菌效果比较

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