《化妆品微生物标准检验方法》GB 7918.1～5——87(3)

成分： 营养琼脂 100mL 脱纤维羊血(或兔血) 10mL

制法：将营养琼脂加热融化，待冷至50℃左右无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。 4.4 甘露醇发酵培养基

成分： 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 甘露醇 10g 牛肉膏 5g 0.2%麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL

制法： 将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，68.95kPa(10 lb) 20min灭菌备用。 4.5 兔(人)血浆制备

取 3.8% 柠檬酸钠溶液，103.43kPa(15 lb) 30min高压灭菌，1份加兔(人)全血4份，混匀静置；2000rpm～3000 rpm离心3min～5min。血球下沉，取上面血浆。 4.6 无菌液体石蜡。

5 操作步骤

5.1 增菌：取1:10 稀释的样品10mL接种到90mL SCDLP 液体培养基中，置37℃培养箱，培养24h。

5.2 分离：自上述增菌培养液中，取1～2接种环，划线接种在Baird Parker平板，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置37℃培养24h～48h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker 平板上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37℃培养24h。

5.3 染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5μm～1μm。 5.4 甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入2mm～3mm 的灭菌液体石蜡，置37℃培养24h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。 5.5 血浆凝固酶试验：吸取1:4新鲜血浆0.5mL，放入灭菌小试管中，加入待检菌24h肉汤培养物0.5mL。混匀，放37℃恒温箱或恒温水浴中，每半小时观察一次，6h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别加入灭菌1:4 血浆0.5mL，混匀，作为对照。

6 检验结果报告

经增菌培养后，在分离平板上有典型或可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。

六、霉菌和酵母菌

Molds and Yeast Count

1 范围

本规范规定了化妆品中霉菌和酵母菌数的检测方法。 本规范适用于各种化妆品中霉菌和酵母菌的总数测定。 2 定义

本规范采用下列定义。

霉菌和酵母菌总数是指化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌菌落总数，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。 本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃培养72h，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

3 仪器和设备

3.1 恒温霉菌培养箱：28℃。 3.2 振荡器。 3.3 天平。 3.4 三角瓶。 3.5 试管。 3.6 试管架。

3.7 平皿：直径90mm。

3.8 刻度吸管：1mL、2mL、10mL。 3.9 量筒。 3.10 酒精灯。 3.11 高压灭菌器。

4 培养基和试剂

4.1 生理盐水 见总则中3.1。 4.2 虎红(孟加拉红)培养基

成分： 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 1g 硫酸镁(含7H2O) 0.5g 琼脂 20g 1/3000虎红溶液 100mL (四氯四碘荧光素)

蒸馏水 1000mL 氯霉素 100mg

制法： 将上述前5种成分加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液。分装后，103.43kPa(15

lb)20min高压灭菌。另用少量乙醇溶解氯霉素，过滤除菌后，加入培养基中，若无氯霉素，可用链霉素代替，每1000mL培养基加链霉素30mg。

5 操作步骤

5.1 样品稀释 见菌落总数测定中6.1。

5.2 取1:10的检液2mL分别注入2个灭菌平皿内，每皿1mL（若菌量较多时可顺序再做10倍稀释），另取1个灭菌空平皿（作空白对照），每皿分别注入融化并冷至45℃左右的虎红培养基约15mL，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置28℃培养箱，培养72h，计数平板内生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长，为避免影响其它霉菌和酵母菌的计数时，于48h应及时将此平板取出计数。

5.3 计算方法：先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取菌落数在5～50个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g(或每mL)检样中所含的霉菌和酵母菌数。其它范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。

5.4 每g(或每mL)化妆品含霉菌和酵母菌数以CFU/g(mL)表示。