预防兽医学复习题答案汇总-整理(5)

来源：网络收集时间：2026-07-22

导读：新型病毒载体的构建：Schnell等利用RV反向遗传学操作系统SPBN制备出2株分别表达来源于HIV-1实验室适应株CXCR4 tropic和田间分离株dual-tropic的gpl60基因重组复制缺陷RV。将上述病毒接种事先经重组HIV-1 gp120蛋白

新型病毒载体的构建：Schnell等利用RV反向遗传学操作系统SPBN制备出2株分别表达来源于HIV-1实验室适应株CXCR4 tropic和田间分离株dual-tropic的gpl60基因重组复制缺陷RV。将上述病毒接种事先经重组HIV-1 gp120蛋白免疫的小鼠后，均可在血清中检测出滴度高达1：800的HIV-1中和抗体。Siler等同样利用SPBN成功地构建了表达丙肝病毒E2蛋白的重组RV，将灭活或者纯化的重组病毒免疫小鼠，可以诱发针对E2蛋白强烈的细胞免疫应答。Smith等将炭疽杆菌的保护性抗原的第四域插入到SPBN株G蛋白基因后的基因区，构建出表达G和炭疽杆菌保护性抗原的嵌合病毒，小鼠实验表明能够产生对RV和炭疽杆菌的保护性抗体。

新型安全疫苗的开发：Faber等构建了含有细胞色素c基因的RV重组病毒，实验证明可以显著增强免疫反应。之后，将RV重组病毒SPBNGA携带了SADB19株的糖蛋白，其中333位的Arg由Glu替代，成年鼠脑内接种后无致病性。此外，插入2个G 的重组病毒RV SPBNGA GAN 可以起GP的超表达，并且增强细胞的凋亡作用，活体平行试验表明免疫原性增强。Muto等在构建的弱毒株rRc-HL反向遗传学系统基础上构建了双G蛋白R(NPMGGL)株，该弱毒株感染的细胞不但病毒滴度增加而且G蛋白表达量增加了1.5倍，表明免疫效果比rRC—HL株更好。本方向还包括以狂犬病毒为载体，表达人类免疫缺陷病毒l型gag蛋白的病毒能够作为理想疫苗株；以狂犬病毒为载体，增加狂犬病毒自身一个G基因表达的重组病毒，与原病毒相比，对鼠有很强的免疫原性，但致病性降低．以狂犬病毒为载体，表达禽流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)糖蛋白，可刺激机体产生细胞和体液免疫，以探索以狂犬病毒为载体的新型基因工程疫苗．

21．动物传染性海绵状脑病的发生原因及可能的预防措施。

BSE的病原为朊病毒，对理化因素有较强的抵抗力。外观为淀粉样颗粒，可以多种形式存在，如prpc(正常蛋白酶抗性蛋白)、prpsc('致病性蛋白酶抗性蛋自)。prpsc是由宿主基因编码的，与prpc的区别主要表现于理化性质上:prpsc在用去污剂抽提时，聚集成大分子的纤维样结构(SAF一痒疫相关纤维)，且对蛋白酶K不敏感，prpc则相反。prpsc的二级结构与prpc明显不同:prpsc无或少α-螺旋结构，有β-折叠片结构;prpc有α-螺旋结构，无或少β-折叠片结构。现普遍认为，prpsc是由prpc翻译后修饰而来的。prpc的原有功能不明。prpsc有嗜同种性，决定宿主的易感性，且是选择靶神经元群体的分子基础。prp序列保守性和氨基酸特性影响朊病毒种间传播的效率。据推测，prpsc可以指导prpc折叠、组装，通过生物体内部循环，逐渐聚集于大脑、脊髓，破坏神经细胞，使人畜患病，以至死亡。

目前，人类还没有掌握对付BSE的有效疗法，只能采取一些防范措施。英国已于1988年7月18日宣布:禁止使用反刍兽源肉骨粉饲喂反刍兽。欧盟也先后制定了一些政策，对BSE的预防起到了一定作用。2001年4月19日，欧盟科学指导委员会(SSC)再次提出了对BSE的9点意见。我国虽尚未发现BSE，但为了拒之于国门之外，我国于2001年成立了BSE监测中心。但仅有这些显然还不够，还要动员社会各界产加防范。主要措施如下:①增强防范意识，发现疫情后及时上报，妥善处理; ②加大防疫力度，严厉打击肉品走私活动，提高我国肉品信誉，保证质

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量; ③严格入境检疫：1996年3月29日，农业部通知要求严防BSE传入我国。2001年3月27日，卫生部、出入境检疫局重申，要加强防范BSE。禁止疫区的动物及其产品入境，对来自疫区的交通工具进行严格的消毒处理。加强对入境货物、邮寄品的检查，对途经或停留我国境内的航班、船只废弃物等做无害化处理; ④严把饲料质量关。在饲料生产上要保证消灭病原因子，禁止给反刍动物饲喂反刍动物组织; ⑤交换遗传材料(精液、胚胎)方面要注意防范病原因子的引入; ⑥一旦发现有可疑病畜即焚毁; ⑦加强食品卫生检疫，杜绝经食物链引入BSE；⑧加大研究力度，促进防治朊病毒病药物的研制开发。不久的将来，传染性海绵状脑病将不再是不治之症。

22．动物传染性海绵状脑病如何进行确诊？

BSE的诊断以组织病理学为主，并至少应配合免疫组织化学染色法或西方免疫墨点法或酵素连结免疫吸附分析法等其中一种检验方能进行确诊，兹将已建立之实验室诊断方法详述如后：

(一) 组织病理学诊断法

将采集的牛脑组织置于10 % 中性福尔马林液固定完全后，取大脑、小脑及脑干共十个部位的脑组织，其重点部位为延脑 (medulla oblongata) 成"V"字形尖端的闩 (obex)，修整为约4mm的厚度，放入脱水包埋盒中，再浸泡于98%的蚁酸中1小时 (将具感染能力的prion不活化)，然后再浸泡于10%中性福尔马林液中2天。再依一般例行之病理切片方法，将组织块脱水、石蜡浸润、石蜡包埋等步骤，制作成3-5 m厚之切片，脱蜡后以H&E染色及封片，于显微镜下观察各部位脑组织切片中的病理变化。经H&E染色之组织切片于显微镜下进行判读，感染 BSE牛只在神经病理学上主要呈三个特殊病变为：1. 脑皮质灰质部产生空洞状退化。2. 神经元细胞坏死及数目减少。3. 神经星状胶质细胞增多 (astrocytosis)，使脑组织呈现海绵样变性 (spongiform change)。若发现上述病变者，则判定为阳性，但仍需进行下列方法以进行确诊。

(二) 免疫组织化学染色法 (immunohistochemistry, IHC)

利用对prion蛋白质特异性的单株抗体及免疫染色技术来达到侦测牛脑组织中的PrPsc 为目的。其组织切片制作方法与组织病理学诊断之步骤相同，每次染色需同时染阳性对照切片。组织切片如常规进行脱蜡后，以磷酸盐缓冲液 (0.1M phosphate buffer solution, pH7.2, PBS) 洗3次，置于蛋白K溶液中37℃15分钟。将切片放入不锈钢盒中加入沸水，置于1bar 121℃高温高压灭菌器中20分钟后，再以PBS洗3次，然后置于3%双氧水溶液中10分钟，再以PBS洗3次。取出切片，组织周围以无尘拭纸吸干水分，置于保湿盘中，在组织上滴满5%的正常猪血清，于室温20分钟，倒掉血清，在组织上滴满PrP单株抗体 (F99/97.6.1, VMRD Inc.)，置于37℃4小时或隔夜，再以PBS洗3次，在组织上滴满次级抗体 (biotinylated secondary antibody, DAKO ChemMate detection kits)，于室温10分钟，以PBS洗3次，在组织上滴满受质 (peroxidase conjugated streptavidin, DAKO ChemMate detection kits)，置于室温10分钟，以PBS洗3次，再用蒸馏水洗去盐类，在组织上滴满呈色剂 (AEC or DAB substrate, DAKO ChemMate detection kits)，于室温5分钟，用蒸馏水洗。滴上苏木精复染数秒，然后水洗，滴上封片胶，盖上盖玻片，置于显微镜下镜检。

(三) 西方免疫墨点法 (Western immunoblot method)

采用商品化检测套组 (PrionicsR-Check, Roche Applied Science)，其原理主要是侦测脑组织中对蛋白K有抵抗性的PrPsc，因为正常的prion蛋白质会被蛋白K所消化，而不正常的PrPsc对蛋白K具有抗性，只会被部分消化，所以分子量会由32-35kD变为27-30 kD。选取延脑的闩 (obex) 或脑干或大脑灰质部的脑组织，秤重后加入均质液研磨成10倍均质乳剂，取100 l乳剂加10 l 消化缓冲液及10 l 蛋白K混合均匀后置于50℃加热40分钟，然后加10 l消化停止液以终止反应。再加入100 l PAGE样本缓冲液混合均匀，加热至96℃ 5分钟。架设电泳胶片，加入电泳缓冲液于电泳槽内。将待测样本及对照样本各加10 l于电泳胶片孔内以200伏特电泳30-45分钟。电泳胶片取出以湿式转渍器来进行转渍 (t …… 此处隐藏：3629字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……

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