预防兽医学复习题答案汇总-整理(3)

国内细菌耐药性监测

（1）地区性细菌耐药性监测网

（2）跨地区细菌耐药性监测网

（3）国家细菌耐药性监测网

12．我国动物源性耐药性研究的进展。

1.我国兽用抗菌药物耐药性的现状 抗菌药在养殖业的大量使用,随之而来的是抗菌药耐药性不断产生并越来越严重。国内对兽医领域抗菌药的耐药性缺乏有计划和系统的监测,所以,对我国兽用抗菌药的耐药性情况很难做出准确的评价。但总的来说,由于抗菌药的滥用和不合理应用十分普遍,故耐药性是相当严重的。许多临床工作者反映抗菌药的效果比以前差,用药剂量不断加大,这虽然是临床工作者的反映,但也从一个侧面反映了耐药性的严重。

2.对兽用抗菌药物耐药性的研究

2.1大肠杆菌I型整合子/耐药基因盒的分子流行病学调查 细菌基因盒- 整合子系统( gene cassette - integron system)是20世纪90年代新发现的可移动的基因元件(Hall, 1991) 。以上述分离的大肠杆菌耐药菌株为标本,用常规PCR方法扩增整合酶基因对I型整合子流行情况进行了调查,并以TD - PCR 扩增、同源性酶谱分析及直接测序相结合的方法调查整合子插入耐药基因盒的种类,研究猪场大肠杆菌I型整合子/耐药基因盒的分子流行病学。结果表明,猪场大肠杆菌I型整合子流行较普遍, 192株分离菌中有105株携带I型整合子,检出率为54.7% , I型整合子多数位于质粒上;猪场大肠杆菌存在6种I型整合子流行,其中整合二氢叶酸还原酶( dhfr)和氨基糖腺苷转移酶( aadA2)两种耐药基因的I型整合子流行最普遍,检出率达36. 6%。从不同来源分离的大肠杆菌,发现以小猪群分离菌的I型整合子检出率最高,饲养员最低。比较还发现,菌株携带整合子及耐药基因盒的情况与其耐药谱及多重耐药表型有密切关系,敏感菌、单耐药及二耐药菌株几乎不存在I型整合子和耐药基因盒,而耐受3种抗菌药物以上的多重耐药菌株, I型整合子和耐药基因盒检出率显著提高,提示I型整合子可能与细菌的多重耐药有关(吴聪明, 2003) 。

2.2耐氟喹诺酮类大肠杆菌gyrA基因突变研究 从患有大肠杆菌病的动物分离大肠杆菌,并对其进行生化鉴定。按常规方法测定其对恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、麻保沙星的M IC,筛选出5株M IC为4～128mg/ l的耐药菌株(其中猪源2株、鸡2株、犬1株) 。同时,用亚M IC连续递增法传代培养获得禽大肠杆菌(O78)和猫大肠杆菌对恩诺沙星的高度耐药菌各1株(M IC分别为64mg/ l和8mg/ l) 。从7株耐药菌提取DNA,经PCR扩增并分别进行测序,将测序结果与文献发表的大肠杆菌敏感株的gyrA基因的相应区域进行同源性分析。结果表明,各菌株均在第83位和87位的氨基酸上发生了突变,同源性都是98. 3% ,其中犬源耐药菌的突变为Ser83→Leu, Asp87→Tyr;其余6株耐药菌的突变均为Ser83→Leu, Asp87→Asn。这两个突变位点与文献报道的耐药决定区的突变相同,预示gyrA基因Ser83和

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Asp87突变可能参与构成大肠杆菌对氟喹诺酮类的耐药机制(廖晓萍, 2002) 。

2.3耐氟喹诺酮类鸡毒支原体gyrA的基因突变研究 对临床分离的3株鸡毒支原体( FL、HS1和HS2)和实验室经恩诺沙星和环丙沙星诱导的2株支原体( S6 - 10和F14 - 8)对6种氟喹诺酮类药物恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星和麻保沙星测定其M IC,均表现不同程度的耐药,其M IC范围为2～32μg/ml。对上述菌株提取DNA,经酶切鉴定和质粒PCR鉴定,确认转化子含有gyrA 基因目的片段后,进行测序并用DNASIS分析软件对测序结果进行分析。结果显示,临床分离的3株鸡毒支原体中, 1株在gyrA亚基QRDR未发生任何取代, 2株则在第83位有一相同的氨基酸取代( Ser83→ Ile) ,其中1株还发生第87位取代(Glu87→Gly) ,诱导的2株耐药菌, S6 - 10株在恩诺沙星药物压力下获得的耐药株最常见的突变位点是gyrA第83位( Ser83→ Ile) ,高水平耐药株在第82位增加1个氨基酸取代位点(Asp82→Gly) ,但在第87位不发生任何取代;而S6 - 10株在环丙沙星药物压力下获得的耐药株首先在第87位发生突变(Glu87→Gln /Gly) ,高水平耐药株在第83位增加1个突变位点( Ser83→Ile) 。F14 - 8株在两种药物压力诱导下产生的耐药株最常见的突变位点是gyrA 第87 位( Glu87 →Gln /Gly) ,高水平耐药侏在第83位增加1个氨基酸取代位点( Ser83→ Ile) 。在发现上述耐药株突变位点的同时,对部分较低水平耐药的菌株却未发现gyrA的任何位点突变,暗示可能存在其他突变位点或耐药机制,尚待进一步研究(蒋红霞, 2002) 。

2.4耐氟喹诺酮类猪源沙门氏菌gyrA基因突变研究 从广东某猪场分离3 株高水平耐氟喹诺酮类药物的沙门氏菌(M IC764μg/ml) ,通过PCR方法扩增gyrA基因片段,然后进行克隆测序。结果表明, 3株沙门氏菌均发生Ser83 ( TCC) →Phe( TTC)及Asp87 (GAC) →Asn (AAC)突变,其中1株还发生了His78 (CAT) →Tyr ( TAT)的突变,国内外尚未见报道,这一突变位点对耐药性的意义,有待进一步的研究。由此可见,高度耐药的猪霍乱沙门氏菌的gyrA基因可发生双位点突变,个别菌株还可能发生3位点突变。由于测定的菌株不多,上述结果尚待进一步重复验证.

3.动物源细菌耐药性的扩散与传递 从对大肠杆菌耐药性的调查结果,各类养殖场动物、环境和饲养员分离的大肠杆菌耐药性趋势分存均很相似,而且三种来源的大肠杆菌之间还存在不少相同耐药谱的多耐药菌株,尤其是动物源及环境源的分离菌更为接近,这表明耐药菌在动物、环境和饲养员之间可能存在扩散、传递现象。虽然许多现象表明耐药菌株的耐药因子可以通过某种机制传递给人类病原菌,但动物源细菌耐药性可否向人类病原菌传递的问题一直存在着争论。据Hunter报道,从应用安普霉素( ap ramycin)多年的猪场的仔猪粪便,周围环境和牧场主的粪便中均分离到耐安普霉素的大肠杆菌,这些耐药菌株中都含有一个相似的大约为62kb的耐药质粒,而且这些质粒可以互相传递。国内这方面的研究报道很少,只有胡子鉴曾通过大肠杆菌耐药谱调查和脉冲场凝胶电泳比较相同或相似耐药谱之间的亲缘关系,结果发现同一养殖场不同动物个体及饲养员相同或相近耐药谱的菌株,其脉冲场凝胶电泳指纹相似,因此认为同处一环境对氟喹诺酮类耐药的大肠杆菌可能由克隆传播造成的。

关于细菌耐药性的扩散机制和方式,国际上已经作了非常广泛深入的研究,细菌除通过基因突变获得耐药性外,还可通过携带可转移遗传因子包括质粒、转座子和噬菌体等使耐药性扩散传播。20世纪90年代又发现了细菌耐药性的整合子/基因盒系统(Hall, 1991) ,根据我们的调查,猪场分离的大肠杆菌I型整合子及耐药基因盒检出率达54. 7% ,而且携带两个整合子的现象较普遍,占整盒子检出率的15. 2% ,由于整盒子潜在的基因捕获及整合表达能力,将来可能会更广泛流行,尤其是在药物选择压力持续作用下,这种可能性更大,对细菌耐药性的传播可能是一种严重的威胁。

13. 细菌对临床常用抗菌药物耐药机制的研究进展。

（1）灭活酶和钝化酶的产生。细菌能产生可破坏抗菌药物或使之失去抗菌作用的酶,使药物在作用于菌体前即被破坏或失效。如β-内酰胺酶，氨基糖苷类钝化酶，氯霉素乙酰转移酶，红霉素酯酶和其它灭活酶。

（2）抗菌药物渗透障碍

（3）主动外排耐药机制

（4）药物作用靶位的改变

（5）代谢途径或代谢状态改变

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14．禽流感病毒的致病性和毒力主要有哪些基因决定的，这些基因的主要功能有哪些？

（1.）HA基因

HA与细胞受体结合后，病毒被内吞到 …… 此处隐藏：3305字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……