2012细胞工程教学提纲及补充思考题 - 图文(4)

? （4）植物生长激素（用量常在0.1～1mg/L）

? 生长素能促进细胞分裂，促使根的形成，最常用的有吲哚乙酸（IAA），2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D），萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）。吲哚乙酸是一种吲哚类具有生长素活性的广谱性植物生长调节剂，目前主要用于植物组织培养、诱导愈伤组织形成、促进生根。吲哚丁酸主要应用于促进插条生根。萘乙酸促进植物生长、插条生根。2，4-D用途随浓度而异，效果不一，在较低浓度下是植物组织培养的成分之一，促进愈伤组织的形成。

? 细胞分裂素通常是腺嘌呤衍生物：6-苄基嘌呤（BA）、玉米素（ZT）、激动素（KT）。6-BA是诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长，促进细胞分裂与扩大抑制根的分化。 ? （5）维生素

? 维生素作为植物细胞分裂、分化的生理活性物质，在植物细胞内主要以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。常用的维生素有：盐酸硫胺素（维生素B1)、烟酸（维生素B3）、盐酸吡哆素（维生素B6）、抗坏血酸（维生素C）。一般采用的维生素浓度为0.1～1mg/L。 ? （6）肌醇

? 又叫环已六醇，可促进愈伤组织的生长和胚状体及芽的形成。常用浓度为50～100mg/L。 ? （7）复合物

? 通常为细胞生长调节剂，包括酵母抽提液、麦芽抽提液、椰子汁和水果汁等。一些抽提液对细胞有毒性，现在已被已知成分的营养物质代替。目前仍广泛使用的是椰子汁。

? 组培常用基本培养基是MS培养基，另外还有B5、N6、NT、AA等培养基。调pH5.5～5.8。 ? 培养基及器械的消毒：

? 玻璃培养仪器及无菌操作所用的水、滤纸、纱布、各种器械如解剖刀、解剖剪、解剖针、镊子等通常与培养基一起事先用高压灭菌锅灭菌备用。

? 四、植物组培的基本步骤 ? 1、培养材料的采集 ? 2、材料消毒 ? 3、制备外植体 ? 4、接种和培养 ? 5、诱导生根

? 6、炼苗、移栽

? 1、培养材料的采集

? 理论上全能植物细胞有3类： ? （1）受精卵

? （2）根尖、茎尖、叶、花等分生组织细胞 ? （3）雌雄配子及单倍体细胞，如花药、花粉粒等

? 在快速繁殖应用中，通常用茎尖，一般切0.5cm左右；如果想要脱毒苗，通常只切茎尖0.1mm以内的部分，因为茎尖分生组织没有分化出维管组织，病毒难以感染到这个部位，但一般说来，外植体越小，培养难度越大。 ? 2、培养材料的消毒

? 材料先用自来水冲洗干净→用蒸馏水冲洗（以下在超净台上进行无菌操作）→无菌水冲洗→无菌滤纸吸干水→已消毒解剖刀切成小块→70%酒精浸泡30～60s→移入漂白粉饱和液或0.01%升汞（HgCl2）消毒10min左右→无菌水冲洗→无菌滤纸吸干水 常用消毒剂效果的比较

? 植物组织培养中常遇到的问题－－污染

? 污染连同褐变、玻璃化被称为植物组培三大难题。 ? 1、污染的原因

? （1）外植体材料表面消毒不彻底或内生菌随材料带入； ? （2）培养基和接种工具消毒不彻底； ? （3）接种室和超净台不符合要求； ? （4）操作人员不遵守操作规程； ? （5）培养过程中环境空气不洁净污染等。 ? 2、污染的控制

? （1）将材料冲洗足够干净，严格消毒灭菌。可采用多次灭菌法。 ? （2）在培养基中加入一定量的抗生素，如青霉素、链霉素、新霉素、卡那霉素等，但抗生素对培养物的生长和分化会产生一定的抑制，应避免长期使用。

? （3）培养基灭菌时，要检查高压灭菌的温度、压力、时间及操作是否正常等。

? （4）接种室定期用紫外灯照射或酒精喷雾或甲醛薰蒸等。超净台接种前用酒精擦拭后再开机灭菌。

? （5）接种前，接种人员要严格消毒，认真洗手，酒精擦手；在接种时规范操作，常用酒精擦手。接种工具常在酒精灯火焰上灼烧。接种前后培养器皿开口需转动烘烤。 ? 3、制备外植体

? 用消毒工具将表面消毒的材料作些处理（芽除鳞片、嫩枝除外皮、种子去种皮、去胚乳等，叶片直接切成0.2～0.5cm小片，想要脱毒