2012细胞工程教学提纲及补充思考题 - 图文(12)

? （1）取材分离，酶液组织消化（胰蛋白酶等） ? （2）过滤或离心除渣 ? （3）吹打分散，接种培养 ? 胰酶消化动物细胞的基本步骤:

? （1）往剪碎的组织块中加入30～50倍体积的0.25%胰蛋白酶； ? （2）在37℃水浴30～60min，每5～10min摇一次； ? （3）Hanks液漂洗2次，每次2～3min；

? （4）800r/min离心5min，弃上清液，加营养液，如有大块可用纱网过滤。

? 胶原酶对胶原和细胞间质有较强的消化作用，适用于消化纤维组织、上皮组织、癌组织等，不受Mg2+和Ca 2+的螯合影响，作用温和，无需机械振荡。胶原酶消化动物细胞的基本步骤:

? （1）往已经剪碎的动物组织块中加入5mL 2000U/mL的胶原酶液； ? （2）水浴4～48h，中间可更换酶液一次；

? （3）当组织变软分散于瓶底时，轻轻振荡散成细胞团或单个细胞，小心倒出培养液；

? （4）800r/min离心5min，弃上清液，重悬于BSS液中，再离心一次；

? （5）加入培养液制成细胞悬浮液。 ? 为什么培养的细胞要及时传代？

? 体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性，也就是说当一个