乳制品工艺学 - 图文(6)

2.7乙酸铅溶液22 g/L:取22 g乙酸铅用约300 rnL水落解后定容至1 L 2.8滤膜:0.45 pm，有机相。

2.9甲醉溶液:200 mL甲醇(3.2.1)加人800 mL一级水，混匀。

2.10流动相:称取2.02g庚烷磺酸钠和2.10g柠檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。取 该溶液900 mL加入100 ML乙腈(3.2.2) 2.11三聚氰胺标准品(纯度>9996)。 2.12三聚仅胺标准溶液

2.12.1标准储备液:称取100 mg(精确到0.1 mg)的三聚氰胺标准品，用甲醇溶液((3.2.9)溶解并定

容于100 ML容量瓶中，该溶液浓度为1 mg/rnL，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。NY/T1372-2007 2.12.2标准中间液:吸取标准储备液5.00 mL, V 50 mL容量瓶内，用甲醇溶液(3.2.9)定容至50ML，该溶液三聚氰胺浓度为100 icg/mL，于4℃冰箱内贮存，有效期1个月。

2.12.3标准工作液:用移液管分别移取标准中间液1 mL,5 mL,10 mL,25 mL,50 mL于5个100 ML容量瓶内，用甲醇溶液(3.2.9)定容，该溶液三聚氰胺浓度为1.0 tLg/mL,5.0 tLg/mL,10 icg/mL,25 feg/mL,50 pg/mL。于4℃冰箱内贮存，有效期1周。 3仪器与设备

3.1高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器或紫外检测器。3.2离心机:10 000 r/nuns 3.3旋混合器。

3.4超声波清洗器。3.5氮吹仪，可控温至60r-。3.6固相萃取装置。3.7高速匀质器。3.8索式提取器。3.9展荡摇床。 4试样制备

按照(3,B/T 20195的规定制备试样。) 5测定步骤 5.1样品预处理

对奶粉等样品的预处理可采用Sepax-UCT DBX产品（60 mg / 3 mL，产品订货号SSDBX063）。 样品的处理步骤如下： 取奶粉5 g，加入1%三氯乙酸水溶液50 mL，摇匀。再加2 %乙酸铅2 mL，超声波处理20分钟，离心分离（8000转/分）10 min，取上清液作为待测样品。 5.2步骤如下：

(1) SPE柱的活化：取Sepax-UCT DBX产品（60 mg / 3 mL，产品订货号 SSDBX063），依次用甲醇3 mL和水3 mL冲洗。

(2) 上样：取上述样品溶液3 mL加入SPE柱的顶端。液滴的流速控制在1 mL/min以内。 (3) 洗涤：用水3 mL和甲醇3 mL进行冲洗，抽近干。

(4) 洗脱：用5 mL含5 %氨水的甲醇进行冲洗，收集洗脱液，在50℃下用氮气吹干，然后加入2 mL流动相溶解。(1) HILIC方法

该方法采用赛分公司的HILIC Polar-100色谱柱（4.6 mm I.D.×250 mm，5 μm，订货号131585-4625）。 参考谱图如下。

色谱柱： HILIC Polar-100（4.6 mm I.D.×250 mm, 5 μm） 流动相： 10 mM NH4Ac: 乙腈=10: 90 (v/v) 流速： 1 mL/min 进样量： 10 μL 检测波长： 240 nm (2) 离子交换色谱法

该方法采用采用赛分公司的Sepax HP-SCX色谱柱（4.6 mm I.D.×250 mm，5 μm，订货号120365-4625）。 参考谱图如下。

色谱条件如下：

色谱柱：Sepax HP-SCX（4.6 mm I.D.×250 mm, 5 μm） 流动相：10 mM NH4Ac 流速： 1 mL/min 进样量：10 μL 检测波长：240 nm

在该色谱体系中，以三聚氰胺计理论塔板数每米可高达180000，如此高的柱效使其非常利于食品中三聚氰胺的测定。 (3) 常规方法

针对常规的离子对色谱方法，赛分公司的Sepax GP-C8色谱柱（4.6 mm I.D.×150 mm，5 μm，订货号107084-4615）也非常适合。

I：参考中国农业部标准NY-T 1372-2007 参考谱图如下。

色谱条件如下：

色谱柱：Sepax GP-C8（4.6 mm I.D.×150 mm, 5 μm） 缓冲液：10 mM柠檬酸，10 mM庚烷磺酸钠 流动相：缓冲液: 乙腈=90: 10 (v/v) 流速：1 mL/min 进样量：10 μL 检测波长：240 nm

其中三聚氰胺在8.8 min出峰，拖尾因子1.0，以三聚氰胺计理论塔板数每米可高达80000。 II：参考美国食品药品监督管理局（FDA）三聚氰胺检测方法 参考谱图如下。

色谱条件如下：

色谱柱：Sepax GP-C8（4.6 mm I.D.×150 mm, 5 μm） 缓冲液：10 mM柠檬酸，10 mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0

流动相：缓冲液: 乙腈=85: 15 (v/v) 流速：1 mL/min 进样量：10 μL 检测波长：240 nm

其中三聚氰胺在8.2 min出峰，拖尾因子1.0，以三聚氰胺计理论塔板数每米可高达80000。 八、掺碱的检验

为掩盖牛乳酸败现象，降低酸度，故掺入中和剂（碱类物质），对人体健康极为不利。下面介绍溴麝香草酚蓝法。 1.原理 溴麝香草酚蓝是一种酸碱指示剂，在pH6.0-7.6溶液中会出现从黄到蓝的颜色变化。乳掺碱后，氢离子浓度发生变化，因而与溴麝香草酚蓝的显色反应与正常乳不同，由颜色的变化可判断加碱量的多少。

2.试剂 0.04%溴麝香草酚蓝乙醇液 3.检测步骤

取5mL乳样于试管中，将试管呈斜位，沿管壁小心加入0.04%溴麝香草酚蓝乙醇液 5滴，小心斜转3次，然后垂直，2min后观察。同时做正常乳试验。

4.判定

两液界面环层呈绿→青色为掺碱，正常乳为黄色。牛乳中碱的浓度与界面环层颜色特征的关系见表4-7。

表4-7牛乳中掺碱评定表

牛乳中碱的浓度/% 无 0.03 0.05 0.1 0.3 0.5 0.7 1.0 1.5 界面环层颜色特征 黄色 黄绿色 淡绿色 绿色 深绿色 青绿色 淡青色 青色 深青色 八、菌落总数的测定 （一）菌落总数

是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用 （二）设备和材料

1、温箱：36±1℃。 2、冰箱：0～4℃。 3、恒温水浴：46±1℃。 4、天平。 5、电炉。 6、吸管。 7、广口瓶或三角瓶：容量为500mL。8、玻璃珠：直径约5mm。 9、平皿：直径为90mm。 10、试管。 11、放大镜。 12、菌落计数器。 13、酒精灯。 14、均质器或乳钵。 15、试管架。 16、灭菌刀或剪子。 17、灭菌镊子。 （三）培养基和试剂

1、营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。 2、磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。 3、生理盐水。 4、75％乙醇。

（四）检验程序菌落总数的检验程序如下。

1、检 样 2、做成几个适当倍数的稀释液 3、选择2～3个适宜稀释度

4、各以1mL分别加入灭菌平皿内，每皿内加入适量营养琼脂在36±1℃ 培养48±2h 5、菌落计数6、报告 （五）操作步骤 1、检样稀释及培养

（1）以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10 的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8 000～10 000r/min的速度处理1min, 做成1∶10的均匀稀释液。

（2）用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶10 0的稀释液。

（3）另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次, 即换用1支1mL灭菌吸管。

（4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2～3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该

稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。

（5）稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀。同时将 …… 此处隐藏：4675字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……