微生物初级考试细菌部分(9)

(1)应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。 (2)若有2个稀释度，其生长的菌落数均在30—300之间，则视两者之比值来决定。若其比值小于或等于2（≤2），应报告其平均数； 若大于（＞2）2则报告其中较小的数字。

(3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300【＞300 】，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

(4)若所有稀释度的平均菌落数均小于【30＜】，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之

(5)若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。 (6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

3． 菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五人方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。 第三节 大肠茵群测定

大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。

食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 一、大肠菌群检验方法 (一)检样稀释

1、以无菌操作将检样25ml(g)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，

经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000—10000转／分的速度处理1分钟，做成1：10的均匀稀释液。

2．用lml灭菌吸管吸取1：10稀释液lml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。

3．另取lml灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释1次，换用1支lml灭菌吸管。

4．根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择3个稀释度，每个

稀释度接种3管。 (二)乳糖发酵试验

将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在lml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lml及lml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。

每一稀释度接种3管，置36℃±1℃温箱内，培养(24℃±2℃)小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气。则可报告为大肠菌群阴性， 如有产气者，则按下列程序进行。 (三)分离培养：

将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃温箱内，培养18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并做革兰染色和证实试验。 (四)证实试验

在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃温箱内培养(24℃±2℃)小时，观察产气情况。 凡乳糖管产气、革兰染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。 (五)报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。 二、粪大肠菌群检验方法

1、用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物转种于EC肉汤管内，置44.5℃±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，

培养(24±2)小时，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℉培养18～24小时，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。 2．结果报告 根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)粪大肠菌群的MPN值

第四章 免疫血清学知识 第一节：血清学：一、基础知识：

1、Ag-Ab反应结合力： 有4种力致使Ag-Ab结合，其中一以静电引力为最重要。

2、Ag-Ab反应特点（1）特异性、（2）阶段性（两个阶段）、（3）可逆性、（5）比例性（Ag与Ab结合比例以3：2为最佳）（Ag=3，Ab=2）。

3、影响Ag-Ab反应的因素：（1）温度（多数情况下反应适宜温度为37℃）、（2）PH值（一般反应适宜PH值6～8）、

（3）电解质（多用0.85%盐水）。

当温度升高反应加快，电解质浓度加大时反应敏感性升高，无电解质时Ag与Ab基本上不反应。

参加反应的Ag也有影响，Ag浓度超出适宜量使反应的敏感性下降，过量的Ab会使反应出现前滞现象。

（4）血清交叉反应：出现血清交叉反应是说明有共同抗原存在。 二、血清检验技术：

1、血清凝集反应：采用颗粒状Ag（死菌或活菌，多用死菌）进行的血清反应。 ①玻片凝集是其中一种，有许多优点，最重要的优点是报告结果快，多用于快速诊断。

②试管凝集是最多用的一种方法，从温箱中放24小时后取出反应管在室温放2个少时再判定为宜，判定凝集滴度以凝集程度为（+ + ）而定。

③协同凝集用SPA（葡萄球菌A蛋白）与IgG的Fc结合后进行的凝集反应。SPA与IgG结合具有种属性，（容）易与兔血清中的IgG结合。用此试验主要查Ag。 2、抗球蛋白试验：是用检查不完全Ab（半Ab），在试验中所用第二Ab是双价抗体。基本方法是以试管凝集试验为基础。

3、沉淀反应：其中包括①环状反应、②絮状反应、③琼脂扩散反应等。沉淀反应是用可溶性Ag。Ag-Ab沉淀反应用的电泳是琼脂电泳和对流电泳。 环状沉淀反应的沉淀环是在Ag与Ab两液面交界处形成，判定时间是3～7分钟（环状沉淀反应）。

用琼脂扩散反应做Ag分析时，其反应温度在4℃～6℃下进行为宜，一般是72小时后判定结果。（琼脂扩散反应）

用其进行诊断时多在18℃～22℃下进行，琼脂浓度多在1%～2%。

4、电泳： 用电泳做诊断多为琼脂电泳和对流电泳。这类电泳反应本质属于Ag-Ab

沉淀反应。

5、CFT（补体）： 参与CFT有两个反应系统 5种成分参加 。其中补体（CFT用的补体是豚tun鼠血清中补体）是此反应的纽带。

它（CFT）与两个系统的结合是非特异性的。在CFT中用豚鼠血清中补体，常用灭活温度是56℃ 30分钟，不同动物的血清补体灭活温度是不同的。 CFT又分为①温CFT、②冷CFT。

温CFT：是指反应温度37℃ 30分钟，主要是查IgG类Ab。反应管出现不溶血现象是阳性反应。补体是多为1：15-1：20稀释度。

冷CFT：是在4℃～6℃（琼脂扩散反应做Ag分析时温度也是4℃～6℃）进行此反应多用于查Ag。

此外，补体（CFT）还参与溶血反应和溶菌反应。 第二节免疫学基础：

抗原（Ag）：Ag是指能够刺激机体产生免疫应答（产生Ab、细胞免疫等）物质。 完全Ag是指既有免疫原性又有反应原性的物质，而只有反应原性无免疫原性的物质称为半抗原。

决定Ag特异性的最小化学亚单位称为决定基（蔟cu），又称为表位。依其与胸腺的关系又分Ti抗原和TD抗原。

Ti抗原刺激机体产生IgM抗体，TD抗原产生需有T细胞辅助。 蛋白质是抗原性最强的物质，其次是多糖、核酸、类脂是抗原性最弱物质。

人类血型抗原有A和B抗原，它们（A抗原和B抗原）刺激机体产生抗A和抗B抗体。

人类血型抗原是同种异型抗原（同一种属不同个体间的遗传标记不同）。器官移植所产生的排异反应。也是因同种异型抗原所致。

佐剂在免疫中常常采用，它主要的机制是增强机体对Ag的免疫应答。 抗体（Ab）：Ag物质刺 …… 此处隐藏：2604字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……