微生物初级考试细菌部分

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霍乱弧菌（肠道菌疾病检验—肠道属）

1．概述 ：（1） 霍乱是急性肠道传染病，剧烈的无痛性水样腹泻 （2）霍乱主要由01群的古典型和El Tor型以及()139群菌株引起。

（3）()1群称凝集弧菌，非()1群为不凝集弧菌。()1群依菌体中主要抗原成分A、B、C组分分为不同亚群。各称为小川型(含A、B抗原)、稻叶型（含A、C抗原）和彦岛型(含A、B、C抗原)。

（4）()139群最早出现于1992年东南亚。①0139群和()1群El To()抗原不同；②有相同的霍乱毒素基因，对()抗原的免疫血清两者无交叉凝集，o139独特特点是：有荚膜多糖，国际标准株为M045。

霍乱弧菌不侵入上皮细胞，在人的小肠内定居、增殖，释放霍乱毒素。霍乱毒素为A、B两种亚基组成，每个毒素分子A：B数量比为1：5，A又分为A1和A2，毒素酶活性部分在A1亚单位。霍乱毒素通过其B亚单位与人小肠上皮细胞上的GMl受体结合，用GMl—ELISA（酶联免疫吸附实验）可检测霍乱

毒素存在。

兔小肠段结扎试验也可用来检测霍乱弧菌是否产生霍乱毒素。霍乱弧菌引起的肠道局部黏膜免疫是霍乱保护性免疫的基础。针对菌体产生的抗菌免疫以及针对霍乱毒素的抗毒免疫是对霍乱免疫的因素。 2．分离培养与鉴定

显微镜下呈逗点状或弧形，经人工培养传代后，镜下观察呈类似大肠杆菌的杆状。

庆大霉素琼脂、4号琼脂培养基为强选择性培养基，碱性琼脂、碱性胆盐琼脂等为弱选择性培养基。

在庆大霉素琼脂平皿上的菌落形态：带灰色、半透明、圆形扁平稍隆起、菌落边缘湿润。

河水、池塘水等外环境水进行霍乱弧菌分离，采集33．3cm以内的表层水，先用lmol/L 的Na()H将水样pH值调整到8.4—9.2。碱性蛋白胨水37℃增菌6—8小时后，霍乱弧菌在培养液的上层增殖最多。 碱性蛋白胨水可用作霍乱弧菌的运输保存培养基。

V—P试验和第Ⅳ组霍乱噬菌体裂解试验可作为区分()1群古典型与El Tor型菌株的参考指标。

对0139群霍乱弧菌，则可用特异的诊断血清。 3．（噬菌体型为1～6且生物型为a至f的为流行株）

对于霍乱弧菌流行株与非流行株的噬菌体—生物分型试验，最少用两平皿两试管来完成。

区分流行株与非流行株的溶血试验中所用的红细胞为绵羊红细胞。 溶原性测定试验中用双层琼脂法，其中上层半固体琼脂的浓度为o.7％。 山梨醇发酵实验，接种pH8．0的山梨醇发酵管后37℃培养3小时。流行株对山梨醇为慢发酵。

生化反应：分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、产酸不产气。迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。氧化酶、明胶酶试验和ONA酶试验均阳性。产生靛基质，霍乱红反应（即亚硝基靛基质试验）阳性。

(二)副溶血弧菌检验

嗜盐性弧菌 ，已确定有12种不同的()抗原和约60种不同的K抗原。 致病菌株能产生的耐热直接溶血素和不耐热溶血素是副溶血弧菌的主要致病物质。

检验方法：（1）标本采集：患者的粪便、可疑食物。

（2）分离培养：称取样品25g，加225ml 3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐再菌选择性琼脂平板各1个，同时取10ml，加入100 ml增菌液中（40g/LNaCl），放37℃8～16小时培养后，进行平板分离，于37 ℃18—24小时培养后取出观察。

（3）挑取上述可疑菌落，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24小时观察结果。

（4）涂片镜检：将三糖铁培养基反应可疑者(底层变黄，葡萄糖产酸不产气，斜面不变，乳糖蔗糖不分解，有动力，不产生硫化氢)进行涂片革兰染色镜检形态。 ①形态染色：革兰阴性杆菌，随培养基不同菌体形态差异较大，多种形态。两极浓染。菌体一端有单鞭毛，运动活泼。无芽孢、无荚膜。

②培养特性：营养要求不高，在普通培养基中加入适量NaCl即能生长。最适浓度为35g/LNaCl，生长所需 PH 7.0～9.5，最适 PH 7.7。需氧，在液体培养基表面形成菌膜。在厌氧环境下生长较慢。

①在35g/LNaCl琼脂平板上呈蔓延生长，菌落边缘不整齐，凸起、光滑湿润，不透明；

②在副溶血弧菌专用选择培养基上形成1~2.5mm，稍隆起、浑浊、无粘性、绿色菌落；

③在SS平板上不生长或长出1~2mm扁平无色半透明的菌落，不易挑起，挑起时呈粘丝状。

④在羊血琼脂平板上，形成2~3mm圆形、隆起、湿润、灰白色菌落，某些菌株形成β溶血或α溶血

⑤在TCBS琼脂（副溶血弧菌专用选择培养基）上不发酵蔗糖，菌落绿色。 ③生化反应：所有用于该菌的生化反应（副溶血弧菌）培养基需加入30g/LNaCl。 本菌（副溶血弧菌）在70g/LNaCl培养基生长，在无盐或10%NaCl以上培养基不生长。能分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、淀粉产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖；靛基质，甲基红试验阳，V-P、H2S、尿素酶试验阴性；致病菌株能使人或兔红

细胞发生溶血，对马红细胞不溶血，称神奈川试验阳性。

动物试验 将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3.5％氯化钠胨水，经37℃16～18小时培养后，小鼠腹腔注射0.3ml，观察2～3天，将死亡小鼠进行解剖并做分离培养。

预防原则 水产品及盐渍品等应煮熟后食用。可用复方新若明、庆大霉素、氟哌酸等抗菌药物治疗。

拟态弧菌 “拟态弧菌与霍乱弧菌相似——形态学、培养特性、抗原结构” 引起胃肠炎和某些肠外感染。但对01群霍乱弧菌标准诊断血清不凝集，可与霍乱弧菌相鉴别。另外拟态弧菌与霍乱弧菌生化特性上最重要的区别在于拟态弧菌不发酵蔗糖（霍乱弧菌发酵蔗糖）。

V-P试验、酒石酸盐及对多粘菌素B的耐药性等也可作为区别这两种弧菌的参考试验。

三、肠致泻性大肠埃希菌

人和动物肠道中的正常菌群，一般对人无害。革兰阴性短杆菌，其抗原结构有3种，即菌体抗原(O抗原)、包膜抗原(K抗原)和鞭毛抗原(H抗原)。

临床表现为：旅游者腹泻或食物中毒。新生儿病房及托幼机构可引起交叉感染而发生流行。

根据发病机制、临床表现、流行病学特征、()抗原血清型及细菌的毒力测定可将致腹泻性大肠杆菌分为5类：

①肠致病性大肠杆菌EPEC的主要毒力因子有菌毛、志贺样毒素(SLTs)和LEE毒力岛。

②肠产毒性大肠杆菌ETEC的主要毒力因子为热不稳定毒素、热稳定毒素及与致病性相关的定居因子。

③肠侵袭性大肠杆菌EIEC在毒力因子和致病机制上与志贺菌基本一致。 ④肠出血性大肠杆菌EHEC的主要毒力因子有志贺样毒素(SLTs)、溶血素、LEE毒力岛及其他未知的毒力因素。

⑤肠集聚性粘附大肠杆菌(EAggEC)是一类新发现的致泻性大肠杆菌，目前已知的毒力因子有菌毛和热稳定肠毒素。主要与小儿顽固性腹泻有关。

4．鉴别诊断

EPEC引起肠炎鉴别诊断：①痢疾②沙门菌肠炎③空肠弯曲菌肠炎④病毒性肠炎⑤幼儿急疹等。

ETEC：主要①霍乱，其次②病毒性肠炎③沙门菌肠炎。

EIEC：细菌性痢疾，确定诊断：EIEC血清凝集试验阳性及大便培养所得的大肠杆菌作豚鼠角膜试验阳性。

致泻大肠埃希菌检验 一、增 菌

样品采集后应尽快检验。除了易腐食品在检验之前应预冷藏外，一般不冷藏。 无菌称取检样25g，加在225ml营养肉汤中，以均质器打碎1分钟或用乳钵加灭菌砂磨碎。取出适量，接种乳糖胆盐培养基，测定大肠菌群MPN，其余的移人500ml广口瓶内，于36℃土1℃培养6小时。挑取l环，接种于1管30ml肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养18小时。 二 …… 此处隐藏：1965字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……