胶体金免疫层析法对AFP、CEA和FN的快速检测(4)

１．２．５胶体金免疫层析技术

１９８９年，ＳｐｉｅｌｂｃｒｇＦ等发展了以纳米金为标志物用于检测艾滋病病毒抗体的渗滤试验，确立了斑点金免疫渗滤试验的基本技术。随着免疫分析日益广泛应用于以临床为主以及非临床领域的检验，免疫分析向两个方向发展：一类为全自动化的酶联免疫分析，另一类为以硝酸纤维素膜为载体的快速免疫分析。前者需要９

第一章上海师范大学硕士学位论文价格昂贵的全自动仪器及与仪器严格配套的各种试剂盒．目前只能在医疗及检测中心应用，不适台远离医疗及检测中心的地区，更不能用于“患者床旁检验”（ｐｏｉｎｔｏｆ龃ｒｃｔｅｓｔｉｎｇ，ＰＯＣＴ）、家庭及流动或广泛的普查之用。随着方便、快速、大众化检测的需要，在酶联免疫分析的基础上主要以硝酸纤维素膜为载体的胶体金免疫诊断技术迅速和广泛地发展起来。

胶体金免疫快速诊断技术主要有两种：斑点金免疫渗滤法（Ｄｏｔ－ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｉｏｎａｓｓａｙ，Ｄ１ＧＦＡ）和胶体会免疫层析法（ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｓｓａｙ，ＧＩＣＡ）。这两种方法的基本原理都是以微孔滤膜为载体，包被已知抗原或抗体，加入待检标本后，经滤膜的毛细管作用或渗滤作用仲标本中的抗原或抗体与膜上包被的抗体或抗原结合，再用胶体金结合物标记而达到检测目的。

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图１－２胶体金免疫层析试剂盒塑料外壳结构设计

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会标免疫层析技术是２０世纪９０年代以来在单克隆技术、胶体金免疫层析技术和新材料基础上发展起来的一项新型快速检测技术。将处理好的Ｎｃ膜、胶金垫、样品垫、吸水纸依次组装在ＰＶＣ底板上．切成４ｍｍ宽的条子，便成为免疫胶体金层析试纸条【槔划，它是结合抗原抗体的免疫学反应和层析原理制各而成的将特异

上海师范大学硕士学位论文第一章性的抗原或抗体以条带状固定于硝酸纤维素膜上，将胶体金标记试剂吸附到结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫后，通过毛细作用向前移动溶解固化在结合挚上的胶体会标记试剂后相瓦反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时待测物和金标试剂的复合物又与之发生特异性结合而被截留聚集在检测带上，通过可目测的胶体金标记物得到直观的显色结果，从而实现特异性的免疫诊断。主要有双抗夹心法和竞争法。

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国Ｉ－３双抗体夹心法原理示意图

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第一章上海师范大学硕士学位论文

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图１４胶体金免疫层析法检测结果示意图（夹心法）

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检测大分子物质一般用夹心法１５１删，其原理如图１．３。以检测蛋白类抗原的试纸条为例，当被检溶液中含有一定量以上的胶体金抗体的对应抗原物质时，抗体会识别抗原分子上他的抗原决定簇并发生免疫反应而形成有胶体金粒子携带的抗体抗原复合物，在试纸条上部吸水材料的牵引力下，胶体金粒子向上扩散，当进入硝酸纤维素膜时，胶体金粒子就犹如分子筛柱层析中的大分子物质一样，在硝酸纤维素膜的孔径中发生层析并达到硝酸纤维素膜上点加了针对同一抗原的另一个抗体的位置，此处为检测线，这样由胶体金粒子携带来的抗体抗原复合物中抗原分子上的抗原决定簇也会被它的对应抗体识别并结合，其结果便是在此处形成胶体金携带的抗体＋抗原＋另一抗体的夹心结构，并固定于此处而显示胶体金的红色，故该法又称为双抗夹心法。其余未反应的免疫胶体金粒子则继续层析，当达到点加了二抗的位置时，此处为质控线，胶体金抗体会被其抗体结合而固定住，从而在此处也出现红色，这种有两个红色标志的结果为阳性结果，但若被检测溶液中无抗原物质或抗原含量极低，无法形成足量的夹心复合物，则硝酸纤维素膜上检测线处就会无红色出现，但点加了二抗的质控线处仍会有红色出现，这是阴性结果。若试纸条质控线无红色出现则说明试纸条已失效，结果见图１．４。１２