质粒DNA限制性酶切图谱分析

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

质粒DNA限制性酶切图谱分析一、DNA的限制性酶切实验原理核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶，这些酶都是从原核生物中发现，它们的功能犹似高等功物的免疫系统，用于抗击外来DNA的侵袭。限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键，产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

一、DNA的限制性酶切实验原理1.限制性内切酶的类型根据限制酶的识别切割特性，催化条件及是否具有修饰酶活性可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。第一类(I型)限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序，它们在识别位点很远的地方任意切割DNA链，但是切割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。这类限制性内切酶在DNA重组技术或基因工程中用处不大，无法用于分析DNA结构或克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

一、DNA的限制性酶切实验原理1.限制性内切酶的类型

第三类(III型)限制性内切酶也有专一的识别顺序，在识别顺序旁边几个核苷酸对的固定位置上切割双链。但这几个核苷酸对也不是特异性的。因此，这种限制性内切酶切割后产生的一定长度DNA片段，具有各种单链末端。因此也不能应用于基因克隆。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

一、DNA的限制性酶切实验原理1.限制性内切酶的类型第三类(Ⅱ型)限制性内切酶就是通常指的DNA限制性内切酶.它们能识别双链DNA的特异顺序，并在这个顺序内进行切割，产生特异的DNA片段；Ⅱ型酶分子量较小，仅需Mg2+作为催化反应的辅助因子，识别顺序一般为4~6个碱基对的反转重复顺序；Ⅱ型内切酶切割双链DNA产生3种不同的切口--5’端突出；3’端突出和平末端。正是得益于限制性的内切酶的发现和应用，才使得人们能在体外有目的地对遗传物质DNA进行改造，从而极大地推动了分子生物学的兴旺和发展。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

粘性末端：是交错切割，结果形成两条单链末端，这种末端的核苷酸顺序是互补的，可形成氢键，所以称为粘性末端。如EcoRI的识别顺序为： 5’…… G|AATTC……3’ 3’…… CTTAA|G…… 5’在双链上交错切割的位置切割后生成 5’……G 3’……CTTAA AATTC……3’ G……5’

各有一个单链末端，二条单链是互补的，其断裂的磷酸二酯键以及氢键可通过DNA连接酶的作用而“粘合”。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

平头末端： II型酶切割方式的另一种是在同一位置上切割双链，产生平头末端。例如EcoRV的识别位置是： 5’…… GAT|ATC…… 3’ 3’…… CTA|TAG…… 5’切割后形成 5’…… GAT 3’…… CTA ATC…… 3’ TAG…… 5’

这种末端同样可以通过DNA连接酶连接起来。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

一、DNA的限

制性酶切实验原理2.限制性核酸内切酶的命名法

用属名的头一个字母和种名的头两个字母表示寄主菌的物种名称，如E. coli用Eco表示，所以用斜体字。用一个字母代表菌株或型，如流感嗜血菌 (Heamophilus influenzae)Rd菌株用d,即Hind。如果一种特殊的寄主菌株，具有几个不同的限制与修饰酶，则以罗马数字表示，如 HindⅠ, HindⅡ,HindⅢ等。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

由 pUC18改造而来，大小为 3162bp。相当于在 pUC18中增加了带有 M13噬菌体 DNA合成的起始与终止以及包装进入噬菌体颗粒所必需的顺式序列。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。„ 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。

二、琼脂糖凝胶电泳实验原理

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。

DNA的限制性酶切实验原理质粒DNA限制性酶切图谱分析„ 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹 …… 此处隐藏：3585字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……