胶体金免疫层析法对AFP、CEA和FN的快速检测

上海师范大学

硕士学位论文

胶体金免疫层析法对AFP、CEA和FN的快速检测

姓名：韩继美

申请学位级别：硕士

专业：物理化学

指导教师：朱龙章

20090401

上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：胶体金免疫层析法对ＡＦＰ、ＣＥＡ和ＦＮ的快速检测

学科专业：物理化学

学位申请人：韩继美

指导老师：朱龙章

摘要

２０世纪８０年代，纳米科技在多学科交叉的基础上发展成为一门新兴学科，近年来，纳米技术不断向生命科学和医学领域渗透，利用纳米生物技术研究和解决其中的重大问题，推动纳米生物及相关技术的发展，正成为当前一个重要的前沿理论，其中纳米免疫技术在生命科学和医学领域中的应用更是倍受关注。纳米胶体金免疫层析方法（Ｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｓｓａｙ，ＧＩＣＡ）是２０世纪９０年代兴起的一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法。本文主要研究了胶体金免疫层析技术在检测甲胎蛋白、癌胚抗原和纤维连接蛋白等肿瘤标志物方面的应用。

（１）采用经典的Ｆｒｅｎｓ方法，用１％的柠檬酸三钠溶液还原氯金酸

溶液制备了２０ｎｍ、４０ｎｍ、７０ｒｉｍ－－－－种不同粒径的胶体金，实验结果表明２０ｎｍ、４０ｎｍ的胶体金比较适合做免疫层析实验。所制备的２０ｎｍ的胶体金，从其ＴＥＭ图上可以清楚的看到，胶体金颗粒具有均匀的粒径和良好的分散性，其最大可见吸收波长在５２１ｎｍ，峰形较窄，也说明粒径比较均一。４０ｎｍ的胶体金最大吸收波长在５２７ｎｍ。

（２）胶体金标记技术（Ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｌａｂｅｌｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）是以胶体金

摘要上海师范大学硕士学位论文作为示踪标记物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。利用胶体金在碱性环境中带负电荷的性质，在适当的条件下可以与蛋白分子通过物理吸附作用发生牢固结合。本文用目测法，研究了胶体金标记甲胎蛋白、癌胚抗原和纤维连接蛋白的最佳ｐＨ和最佳标记蛋白量，实验结果表明他们的最佳标记ｐＨ均为９，最佳标记蛋白量分别为１４．４ｕｇ’ｍｌ～，１４．４ｕｇ‘ｍｌ～，７．２ｕｇ。ｍｌ～。

（３）抗原和抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗

体的抗原结合位点之间，由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原一抗体反应具有高度的特异性，而抗原分子一般具有多个抗原决定簇，因此可以与多个抗体分子发生结合。本文应用双抗体夹心法，将特异性的抗体先固定于硝酸纤维素膜上，免疫胶体金干燥在胶金垫上，然后将吸水纸、ＮＣ膜、胶金垫、样品垫依次组装在ＰＶＣ底板上，切成４ｍｍ宽的试纸条，装入检测卡中备用。实验结果表明，所制备的试纸条简便快速，灵敏度分别为２０ｎｇ ｍｌ～，５ｎｇ ｍｌ～、１００ｎｇ 珏ｄ～，均达到临床要求，与ＰＳＡ、ＣＡｌ２５、ＣＡｌ５．３、Ｆｅｒｒｉ妇、ＨｕｍａｎＡｌｂｕｍｉｎ等没有交叉反应，稳定性良好。

关键字：胶体金；免疫层析；甲胎蛋白；癌胚抗原；纤维连接蛋白Ⅱ

上海师范大学硕士学位论文摘要Ｓｕｂｊｅｃｔ：ＤｅｖｅｌｏｐｅｄｏｆＲａｐｉｄＯｎｅ－ＳｔｅｐＣｏｌｌｏｉｄａｌＧｏｌｄＩｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒｐｈｉｃＡｓｓａｙｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＡＦＰ、ＣＥＡａｎｄＦＮＭａｊｏｒ：ＰｈｙｓｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ

Ｃａｎｄｉｄａｔｅ：ＪｉｍｅｉＨａｎ

Ｄｉｒｅｃｔｅｄｂｙ：ＬｏｎｇｚｈａｎｇＺｈｕ

Ａｂｓｔｒａｃｔ

１９８０ｓ，Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗａｓａｎｅｍｅｒｇｉｎｇｓｕｂｊｅｃｔｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｒｏｍｍｕｌｔｉ—ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ａｎｄｉｔｅｎｊｏｙｅｄａｗｉｄｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｉｎｍａｔｅｒｉａｌｓ，

ｇｒａｄｕａｌｌｙ

ｕｓｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｔｃ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｓｔｈｒｏｕｇｈｓｃｉｅｎｃｅｓａｎｄｍｅｄｉｃｉｎｅｆｉｅｌｄ．Ｔｈｅｏｆ

ｎａｎｏ－ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｔｏｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｒｅｓｏｌｖｅｔｈｅｃｏｎｃｅｒｎｅｄｍａｊｏｒｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄｔｏｐｒｏｍｏｔｅｂｉｏ－ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄｒｅｌａｔｅｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｒｅｂｅｃｏｍｉｎｇａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｒｏｎｔｉｅｒｏｆｃｕｒｒｅｎｔｔｈｅｏｒｉｅｓｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆ

ａｔｔｒａｃｔｇｒｅａｔｅｒｉｍｍｕｎｅｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓａｎｄｍｅｄｉｃｉｎｅｆｉｅｌｄ

ａｔｔｅｎｔｉｏｎ．１９９０ｓ，ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ

ｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｒｏｍａｎａｓｓａｙ（ＧＩＣＡ）ｏｎｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅｍｅｍｂｒａｎｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｗｅｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＧＩＣＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒｓ，ｓｕｃｈ

ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ．ａｓａｌｐｈａ－ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎａｎｄ

（１）Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，Ｆｒｅｎｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｐｒｅｐａｒｅｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｓｍ

摘要上海师范大学硕士学位论文－ｗｉｔｈｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉａｍｅｔｅｒｓｏｆ２０ｎｍ，４０ｎｍ，７０ｎｍ．Ｔｈｅｙｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇｏｌｄｃｈｌｏｒｉｄｅｗｉｔｈ１％ｓｏｄｉｕｍｃｉｔｒａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｐｒｏｃｅｄｕｒｅｄｅｓｃｒｉｂｅｄｂｙＦｒｅｎｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ２０ｎｍ，４０ｎｍｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｓｗｅｒｅｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｄｏｉｎｇｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃａｓｓａｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．ＦｒｏｍｔｈｅＴＥＭｍａｐ，ｗｅｃａｎｃｌｅａｒｌｙｓｅｅｔｈａｔｔｈｅ２０ｎｍｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｐａｒｔｉｃｌｅｓｈａｖｅ

ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ，ｔｈｅｕｎｉｆｏｒｍｓｉｚｅａｎｄｇｏｏｄｍａｘｉｍｕｍｖｉｓｉｂｌｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ

ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ５２１ｎｍ，ａｎａｒｒｏｗｐｅａｋｓｈａｐｅａｌｓｏｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｈａｖｅｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｕｎｉｆｏｒｍｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ．Ｔｈｅｍａｘｉｍｕｍａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ４０ｎｍｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｓｗａｓａｔ５２７ｎｍ．

（２）Ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｌａｂｅｌｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓ

ｏｎａｎｅｗｔｙｐｅａｓａｏｆｉｍｍｕｎｅｍａｒｋｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， …… 此处隐藏：1952字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……