胶体金免疫层析法对AFP、CEA和FN的快速检测(2)

ｃｕｔｉｎｔｏＰＶＣｂｏａｒｄ；Ｔｈｉｒｄｌｙ，ｔｈｅｂｏａｒｄｗａｓ４ｍｍｗｉｄｅｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓ，ｔｈｅｎｐｕｔｔｈｅｍｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

ｕｓｅｃａｒｄｓ．Ｔｈｅｓｉｍｐｌｅ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｆｔｈｅｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｗａｓ

ｒａｐｉｄ，ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＡＦＰ，ＣＥＡａｎｄＦＮｔｅｓｔｓｔｒｉｐｓｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ２０ｎｇ ｍｌ一，５ｎｇ ｍｌ～，１００ｎｇ ｍｌ一，ｔｈｅｙｗｅｒｅｏｆｇｏｏｄｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｌｌａｃｈｉｅｖｅｄｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ．ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＰＳＡ，ＣＡｌ２５，ＣＡｌ５－３，Ｆｅｒｒｉｔｉｎ，ＨｕｍａｎＡｌｂｕｍｉｎ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ａｌｐｈａ－ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ；ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ；ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎＶ

论文独创性声明上海师范大学硕士学位论文

论文独创性声明

本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中做了明确的声明并表示了谢意。

作者签名瓣日期：叫．，．刀

论文使用授权声明

本人完全了解上海师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。

作者签名：南馘导师签名隰１。ｆ砂

上海师范大学硕士学位论文第一章

第一章

１．１研究意义文献综述

纳米科技是２０世纪８０年代来由多学科交叉而逐步发展起来的新兴学科，在生物医学、材料、环境、化学等领域有广泛的应用前景【１１。近年来，随着纳米技术向生命科学和医学领域的不断渗透，利用纳米生物技术研究和解决其中的重大问题，推动纳米生物及相关技术的发展，正成为当前一个重要的前沿理论。其中纳米免疫技术在生命科学和医学领域中的应用更是倍受关注。

纳米胶体金免疫层析方法（Ｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｓｓａｙ，ＧＩＣＡ）是２０世纪９０年代兴起的一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法［２１。其原理是将特异性的抗原或抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品（如尿液、血液、唾液等）后，由于毛细管作用，样品便会与胶金垫上的金标抗体或抗原结合，并沿着硝酸纤维素膜向前移动，当移动至固定有抗原或抗体的区域时，体系中发生抗原与抗体的特异性结合反应，这一反应使胶体金在这一带聚集而显示出胶体金的颜色，从而实现特异性的免疫诊断【引。

胶体金免疫层析检测法不仅具有快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需任何仪器设备［４－５１，而且结果判断直观可靠、容易被基层单位人员掌握，同时也方便病人对病情的自我监测。

原发性肝癌诊断一般是进行肝癌特异性标志物检查，迄今为止，原发性肝癌标志物中应用最广泛、最有价值的是甲胎蛋白和癌胚抗原【甜１１。所以，检测人血清中甲胎蛋白Ｏ岍）和癌胚抗原（ＣＥＡ）是诊断肝癌等恶性肿瘤的重要措施之一

【１２１。检测ＡＦＰ／ＣＥＡ方法有多种，以酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫分析法（ＲＩＡ）最为常用。但ＲＩＡ具有放射性危害，标记物放射性半衰期较短，操作过程繁琐，且需要昂贵的射线检测仪；ＥＬＩＳＡ操作步骤也嫌冗长，还需用酶标仪【１３】。而目前膀胱癌患者临床诊断的金标准为膀胱镜下病理活检，它是一种有创伤性的检查，病人难以忍受其痛苦，而且费用相对较高，越来越多的实验室检测指标（诸如尿Ｆｎ，细胞角蛋白等）开始用于膀胱癌患者的临床诊吲１４１。

为此，应用胶体金免疫层析技术建立一种简便、快速、无创、低价、高灵敏度、特异性强的诊断技术，弥补现有肿瘤诊断方法的不足，可以大大减轻病人的

第一章上海师范大学硕士学位论文痛苦，具有很高的临床应用价值，同时还能减轻病人的经济负担，具有良好的经济效益，为肝癌的早期诊断提供适于普查的新方法，为膀胱癌的筛查、诊断以及术后病人的复查提供有益的借鉴作用。

１．２研究进展

１．２．１纳米金的制备方法

金纳米粒子的制备始于纳米科技开始发展的８０年代末９０年代初。到目前为止，除了经典的Ｆｒｅｎｓ法，已经发展了许多制备金纳米粒子的方法，总体上可分为物理法和化学法【１５】。

物理方法中真空蒸镀是一种常见的方法，但这种方法较难控制金粒子的形状和大小。后来在此基础上产生了软着陆的制备方法【１６１，即在蒸镀过程中是在氩气流中产生金纳米粒子，金原子沉积在表面有一层氩气的冷基底上，这样得到的金纳米粒子更趋于球形，一致性更好。

在化学制备方法中，胶体金的制备一般采用还原法，根据不同种类不同剂量的还原剂，可以制备出不同粒径的胶体金纳米粒子。常用的还原剂有柠檬酸三钠、鞣酸、硼氢化钠等。还原剂的选择与制备的纳米金颗粒的大小有关。一般来说若制备金颗粒直径在５＂－１２ｎｍＮ用白磷或抗坏血酸还原氯金酸；若制备直径大于１２ｎｍ的胶体金则用柠檬酸三钠还原氯金酸。在用同一种还原剂时，制备的金颗粒直径的大小还可通过还原剂的用量来控制，还原剂浓度越高，核浓度也越高，氯化金的还原也就从更多的还原中心开始，因此产生的胶体金粒子数量越多，粒径也越小。

下面介绍最常用的制备方法及注意事项：

１、玻璃容器的清洁：玻璃表面少量的污染会干扰胶体金颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过酸洗、硅化。硅化过程一般是将玻璃容器浸泡于５％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中１分钟，室温干燥后蒸馏水冲洗，再干燥备用。专用的清洁器皿以第一次生成的胶体金稳定其表面，弃去后以双蒸馏水冲洗，可代替硅化处理。

２、试剂、水质和环境：氯金酸极易吸潮，对金属有强烈的腐蚀性，不能使用金属药匙，避免接触天平称盘。其１％水溶液在４＂Ｃ可稳定数月不变。实验用水一般用双蒸馏水。实验室中的尘粒要尽量减少，否则实验的结果将缺乏重复性。２

上海师范大学硕士学位论文第一章金颗粒容易吸附于电极上使之堵塞，故不能用ｐＨ电极测定金溶液的ｐＨ值。

３、抗坏血酸还原法１１７ｌ

取４＂Ｃ预冷的１％的氯金酸水溶液ｌｍｌ，浓度为０．２ｍｏｌ Ｌ－１的碳酸钾溶液１．５ｍｌ，双蒸水２５ｍｌ混匀；在搅拌的条件下加入ｌｍｌ质量分数为０．７％的抗坏血酸水溶液，加双蒸水至１００ｍｌ，加热至溶液变为透明的红色，便制备成了胶体金。

４、硼氰化钠还原法【１８－１９】

在４＂Ｃ预冷的４０ｍｌ双蒸水中加入０．６ｍｌ的质量分数为１％的氯金酸；再加入浓度为０．２ｍｏｌ Ｌ－１的碳酸钾溶液０．２ｍｌ在搅拌条件下，迅速加入新鲜配制的硼氢化钠水溶液（质量浓度为０．５ｍｇ ｍＬ－１）０．４ｍｌ，直至溶液的蓝紫色变为酒红色为止，然后再搅拌５ｍｉｎ．

５、柠檬酸三钠还原法［２０－ …… 此处隐藏：2388字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……