蛋白质磷酸化与信号传导(3)

來自藍綠藻附光合色素，分子量約為105 kDa。屬於Phycobiliproteins家族。每個APC分子上有六個phycocyanobilin chromophores，與R-PE chromophore上的phycoerythrobilin結構相似。激發光源為635nm Red Diode雷射、以及633nm HeNe雷射。

流式細胞儀種類 FACSCalibur 4 Color FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria FACSArray

雷射標示

Red Diode 635nm (Laser 2)HeNe 633nm (Laser 2) HeNe 633nm (Laser 2 / 3)HeNe 633nm (Laser 3) HeNe 633nm (Laser 4) HeNe 633nm (Laser 2) Red Diode 635nm (Laser 2)

偵測之螢光參數

FL4 FL3 FL4 FL6 (SSC-W)

B B B

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以

蛋白质磷酸化与信号传导

APC- Cy7

結合APC與Cy7兩種螢光染劑之複合染劑。長時間曝露於可見光，螢光強度會減弱。散發螢光波長座落於遠紅光區(767nm)。若是使用紅光偵測接收器(例如Hamamatsu R3896光電倍增管)偵測APC-Cy7，建議使用750nm長通濾鏡。

下圖呈現APC-Cy7與APC光譜重疊情形，右圖則為經光補償調節後之圖形。

流式細胞儀種類 FACSCalibur 4 Color FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria FACSArray

雷射標示

Red Diode 635nm (Laser 2)HeNe 633nm (Laser 2) HeNe 633nm (Laser 2 / 3) HeNe 633nm (Laser 3) HeNe 633nm (Laser 4) HeNe 633nm (Laser 2) Red Diode 635nm (Laser 2)

偵測之螢光參數

FL4 FL4 FL5 FL6 (SSC-W)

A A A

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以確認螢光參數之位置。

Fluorescein isothiocyanate (FITC)

FITC分子量為389 Da，是最普遍用來製造抗體或是蛋白質試劑之螢光染劑，具有最高的量子產率(吸光能量轉換成散發螢光之效能)，大約一半的吸收光子均會散發螢光。由於FITC分子相當小，每一個抗體分子(或是蛋白質分子，或是Streptavidin，等等)通常與3~5

個FITC分子結合。

流式細胞儀種類 FACSCalibur/FACScan FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria

雷射標示

Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)

偵測之螢光參數

FL1 FL1 FL1 FL1 D E

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以

蛋白质磷酸化与信号传导

Pacific Blue®

使用UV光為激發光源，主要激發6,8-difluoro- 7- hydroxycoumarin fluorophore，即使於中性環境中也能呈現很強的螢光。 流式細胞儀種類 FACSVantage SE LSRII

雷射標示

Krypton 407nm (Laser 2)Violet 405nm (Laser 2) 或UV 355nm (Laser 2)

FACSAria

Violet 407nm (Laser 3)

偵測之螢光參數

FL4 B B B

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以確認螢光參數之位置。

R- phycoerythrin (R- PE)

螢光亮度最強之螢光染劑之一，來自紅藻的附光合色素，於紅藻細胞內擔任的光能轉運的角色，於光合作用中將光能轉送至葉綠體內。R-PE分子量為240 kDa，每個分子上帶有34個

phycoerythrobilin螢光分子，分子量較大，非常適合流式細胞應用，例如細胞表面抗原分子的絶對定量分析。

流式細胞儀種類 FACSCalibur/FACScan FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria FACSArray

雷射標示

Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Green Diode (Laser 1)

偵測之螢光參數

FL2 FL2 FL2 FL2 C D B

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以確認螢光參數之位置。

PE- Cy5 (正式名稱為 BD Cy- Chrome )

結合R- phycoerythrin (240- kDa蛋白質)及cyanine( Cy5，1.5 kDa)二種螢光染劑之複合染劑。由於這兩種螢光染劑間的光能轉換效率佳，使得吸收光的流失率低於5%，R-PE吸收大部份的光能後均能轉換為575nm螢光波長，再進而激發cyanine以產生更長波長的紅色螢光(785nm)。一般而言，每個抗體或是蛋白質平均結合一個PE-Cy5分子。

因為PE-Cy5複合染劑的激發波長範圍太廣，可被紅光雷射激發產生些許螢光，發生光譜重疊現象，所以不建議與633nm/635nm雷射激發之染劑(例如APC)合用。可與FITC與PE等螢光染劑合用。

由於cyanine易與細胞表面之Fc受體結合產生非特異性反應，所以使用此類抗體前，細胞必須先

蛋白质磷酸化与信号传导

與Fc Block作用以消除非特應性反應。

流式細胞儀種類 FACSCalibur/FACScan FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria

雷射標示

Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)

偵測之螢光參數

FL3 FL3 FL6 FL3 B C

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以確認螢光參數之位置。

PE- Cy7

為PE與Cy7之複合染劑，可與APC等(633nm/635nm激發光之)螢光染劑合用，光譜重疊現象較低。下圖為PE-Cy7與PE光譜重疊校正之圖形，左圖為未補償之圖形；右圖為經光補償校正，PE-Cy7干擾PE光區約佔2.7%。

流式細胞儀種類

FACSCalibur/FACScan FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria FACSArray

雷射標示

Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Green Diode (Laser 1)

偵測之螢光參數

FL3 FL3 FL3 FL3 A A A

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以確認螢光參數之位置。

蛋白质磷酸化与信号传导

PE- Texas Red®

為PE與Texas Red複合染劑，需要使用特別的光學濾鏡610/20nm。當與R-PE共同使用時，應特別小心光補償調節部份。

流式細胞儀種類 FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria

雷射標示

Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)Argon 488nm (Laser 1)

偵測之螢光參數

FL3 FL6 FL3 B C

註：所列之流式細胞儀均為標準配備。若貴單位之儀器具有選配裝置，請與BD技術人員連絡以確認螢光參數之位置。

Peridinin chlorophyll protein (PerCP)

為dinoflagellate (glenodinium)光合作用胞器的組成份子，為一35kDa蛋白質複合物。由於其光漂白特性，對於可見光非常敏感，螢光容易減弱，所以不建議使用於stream-in-air流式細胞儀。若是更換合適的光學濾鏡(例如675/22nm)，可提高螢光訊號接收的能力。

流式細胞儀種類 FACSCalibur/FACScan FACStar Plus FACSVantage SE LSR LSRII FACSAria

雷射標示

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