3_5_二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的研究(2)

精密度实验

取１０支管分别加入０．５ｍｌ葡萄糖标准溶液和１．５ｍｌ

3_5_二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的研究

536 2008, Vol. 29, No. 08

食品科学

加入量可采用１．５ｍｌ。２．４

精密度实验

※分析检测

重。结合葡萄糖显色液－水曲线可以看出，这种影响在λ＜５４０ｎｍ的情况下一直很显著。故本实验ＤＮＳ试剂１最终确定的测定波长选为５４０ｎｍ，而不是５００ｎｍ（最大吸收波长）。同理，由图２可知，ＤＮＳ试剂２最终确定的测定波长为５５０ｎｍ，而不是５００ｎｍ（最大吸收波长）。２．２

加热时间对测定结果的影响

由图３可知，随着沸水浴加热时间的延长，吸光度变大，但两种试剂均在５ｍｉｎ之后吸光度基本不变，说明显色反应基本完成，吸光度较稳定。故ＤＮＳ试剂水浴加热时间在５ｍｉｎ即可。

试剂１

０．８吸光度

０．６０．４０．２００

５

１０１５时间（ｍｉｎ）

２０

２５

试剂２

由表４和表５可知，在本实验条件下ＤＮＳ试剂１的精密度优于ＤＮＳ试剂２。

表２　　　试剂１精密度实验

Table 2 Precision experiment of reagent one

管号

１

２

３０．３６２

４

５

６

７

８

９

１０

吸光度０．３６８０．３６６０．３５３０．３５５０．３５４０．３６００．３６６０．３６３０．７３４

平均值０．３６８　　标准误差　０．００１７４５　　标准差　０．００５５１９

表３　　试剂２精密度实验

Table 3 Precision experiment of reagent two

管号

１

２

３０．７３０

４

５

６

７

８

９

１０

吸光度０．７３４０．７１５０．７２９０．７３４０．７３４０．７２４０．７３８０．７１７０．７３４

平均值０．７３１　　标准误差　０．００３５８７　　标准差　０．０１１３４３

２．５标准曲线

两种试剂的葡萄糖的标准曲线如图６所示。标准曲线表明，葡萄糖浓度在测定范围内显色灵敏、稳定且成良好线性。

１０．８吸光度

０．６０．４０．２００

０．１

０．２

０．３

０．４

０．５

０．６

葡萄糖浓度（ｍｇ／ｍｌ）

图６　　　　ＤＮＳ试剂葡萄糖标准曲线

图３　　　　ＤＮＳ试剂加热时间对测定结果的影响Fig.3 Effects of heating time on absorbance

２．３ＤＮＳ试剂用量及放置时间的确定

０．５ｍｌ１．０ｍｌ１．５ｍｌ２．０ｍｌ２．５ｍｌ３．０ｍｌ

０

５０

１００

１５０

０．４吸光度

０．３８０．３６０．３４０．３２

放置时间（ｍｉｎ）

图４　　　试剂１置时间及用量对吸光度的影响

Fig.6 Standard curve of two

kinds of DNS reagents

３结　　论

在碱性溶液中３，５－二硝基水杨酸被还原糖还原生成

Fig.4 Effects of standing time and reagent one volume on

absorbance

０．８吸光度

０．７０．６０．５

０

２０

４０６０放置时间（ｍｉｎ）

８０

１００

０．５ｍｌ１．０ｍｌ１．５ｍｌ２．０ｍｌ２．５ｍｌ３．０ｍｌ

的氨基化合物在５００ｎｍ波长下具有最大吸收。但在此波长下ＤＮＳ试剂具有一定的吸光度，对测定结果干扰严重，故ＤＮＳ法测定还原糖含量最佳条件为ＤＮＳ试剂用量１．５ｍｌ、沸水浴中保持５ｍｉｎ、定容后放置２０ｍｉｎ后测量，试剂１检测波长５４０ｎｍ，试剂２检测波长为５５０ｎｍ。

参考文献：

［１］［２］［３］［４］［５］

宁正祥．　食品成分分析手册［Ｍ］．　北京：　中国轻工业出版社，１９９８．

中华人民共和国商业标准ＳＢ／Ｔ１００７７—９２　挂面生产工艺技术规程［Ｓ］．

郑远斌，　吴锦忠．　ＤＮＳ比色法测定莲子中多种糖的含量［Ｊ］．　福建中医学院学报，　２００４，１４（４）：　３２－３５．

杨贵明，　蒋爱华，　薛秋生．　用ＤＮＳ光度法测定还原糖的条件研究［Ｊ］．安徽农业科学，　２００６，３４（１４）：　３２５８－３２６４．

孙伟伟，　曹维强，　王静．　ＤＮＳ法测定玉米秸秆中总糖［Ｊ］．　食品研究与开发，　２００６（６）：　１２０－１２４．

图５　　试剂２置时间及用量对吸光度的影响

Fig.5 Effects of standing time and reagent two volume on

absorbance

由图４、５可知，试剂用量和放置时间与吸光度值的关系，当ＤＮＳ试剂用量小于１．５ｍｌ时，溶液吸光度随ＤＮＳ试剂用量的增加而增大，试剂用量在１．５～２ｍｌ时，放置２０ｍｉｎ后吸光度值较稳定。试剂一的用量为２～３ｍｌ时吸光度值波动性较大。在实际测定中，两种试剂的