临床微生物学检验4完整版(4)

④鉴定：白喉棒状杆菌触酶阳性，吲哚和脲酶试验阴性。

白喉棒状杆菌包括无毒株和有毒株，需要通过毒力试验鉴定白喉棒状杆菌的致病菌株，应用白喉抗毒素检测白喉杆菌毒素，确定产毒株，方法有ELISA法和ELek平板毒力试验。

3.白喉棒状杆菌导致的白喉为急性呼吸道传染病，以儿童多见，有假膜，菌体不入血，菌体产生的外毒素不（白喉毒素）入血。

第三十章 分枝杆菌属

1.分枝杆菌（又称抗酸杆菌），具有抗酸染色为阳性。

2.结核分枝杆菌复合群（以结核分枝杆菌感染最常见）

结核分枝杆菌微生物学检验：

①直接显微镜检查。标本直接涂片，作抗酸染色或金胺O荧光染色。 ②分离培养是最可靠的。痰液及其他含有杂菌的标本，在培养前应以适当方法加以处理，以达到杀死或减少杂菌和和液化痰标本的目的。

3.结核分枝杆菌免疫学检测：

结核菌素试验：是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否产生迟发性变态反应的一种试验。

结核菌素是结核分枝杆菌的菌体成分，目前都是用PPD（纯蛋白衍生物）。 ①结核菌素试验时，感染、免疫、变态反应共存，前臂皮内注射，48~72h后判断情况如下表：

②结核菌素试验的主要用途：（简单题）

A.选择BCG（卡介苗）接种对象及测定接种效果；

B.作为婴幼儿结核病诊断的参考；

C.在未接种BCG的人群中做结核分枝杆菌感染的流行病学调查；

D.测定肿瘤患者的细胞免疫功能。

1.麻风分枝杆菌的人工培养迄今为止尚未成功，目前不能人工分离培养，只能做显微镜检查。

第三十一章 厌氧菌（芽孢厌氧菌和无芽孢厌氧菌）

1.在临床厌氧菌感染中，绝大数是由无芽孢厌氧菌（以脆弱类杆菌（BF）最常见）引起的内源性感染（约占90%），且多为与需氧菌或兼性厌氧菌共同引起的混合感染，仅少数为单纯厌氧菌感染。

2.厌氧菌感染的临床指征：

①感染局部有气体产生，这是厌氧菌感染的重要特征之一； ②发生在黏膜附近的感染；

③深部外伤；

④有特殊的分泌物；

⑤某些抗生素治疗无效的感染。

3.厌氧菌感染的细菌学指征：

①分泌物直接涂片革兰染色，发现细菌染色不均、形态奇特呈明显多形态； ②镜检查见细菌，而需氧培养阴性；

③在液体及半固体培养基深部有细菌生长。

4.厌氧菌感染的标本采集

厌氧菌标本采集时须注意：标本不应被正常菌群污染，尽量避免接触空气。是厌氧菌培养成功的关键。

应从无正常菌群寄居的部位用无菌操作方法采集标本。凡含有正常菌群的标本，如齿龈拭子、鼻咽拭子、咯痰、自然排出的尿液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、粪便以及洗胃液等，均不宜作厌氧菌培养。（多选）

用于厌氧菌培养的最佳标本是活检组织或用针抽吸的分泌物和脓液。

5.厌氧菌标本的运送方法：

①针筒运送法；②无氧小瓶运送法（目前常用的方法）；③标本充盈运送法；④组织块运送法；⑤厌氧袋运送法；⑥棉拭运送法。

梭状芽孢杆菌属（是芽孢厌氧菌唯一的菌属）

破伤风梭菌

1.破伤风梭菌是临床常见的革兰阳性厌氧芽孢杆菌，为破伤风的病原菌。

2.破伤风梭菌在芽孢形成后易转变成革兰阴性。

3.破伤风梭菌呈鼓槌状，为本菌典型特征。

4.破伤风梭菌专性厌氧，在普通平板上不易生长，在潮湿的血平板上常呈扩散生长，形成爬行生长物，不易获得单个表面菌落。经培养后形成扁平、灰白色、边缘不齐、周边疏松呈羽毛状的菌落，有狭窄的β溶血。

产气荚膜梭菌

1.产气荚膜梭菌是临床标本中最常见的厌氧芽孢梭菌，为革兰阳性粗大杆菌，两端钝圆，无鞭毛，在机体内可形成明显的荚膜。在组织和人工培养基中很少形成芽胞，为本菌的特点之一。

2.产气荚膜梭菌的菌落中多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，由θ毒素引起，外环不完全溶血，由α毒素引起。

3.Nagler反应：在卵黄平板上，由产气荚膜梭菌产生的卵磷脂酶（α毒素）分解卵黄中的卵磷脂导致菌落周围出现乳白色浑浊圈，能被特异抗血清所中和，称为Nagler反应。

4.“汹涌发酵”现象：产气荚膜梭菌在牛乳培养基中，能分解乳糖产酸使酪蛋白凝固，同时产生大量气体将凝固的酪蛋白冲散形成蜂窝状，并将液面上的凡士林向上推挤，甚至冲开棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵”现象，为产气荚膜梭菌特征之一。

肉毒梭菌在厌氧条件下可产生毒性极强的外毒素‐肉毒毒素，为已知最剧烈的毒素

1.艰难梭菌（因对氧极为敏感，很难分离培养而得名）最常用平板是环丝氨酸‐头孢甲氧霉素‐果糖‐卵黄琼脂（CCFA）平板培养基，形成较大的表面粗糙、边缘不齐的黄色菌落，在紫外线照射下，可见黄绿色荧光。

2.艰难梭菌的微生物学检验

①直接显微镜检查。标本直接涂片做革兰染色镜检，若发现标本中有大量呈优势生长的革兰阳性粗长杆菌，同时结合患者有长期使用抗生素的病史，可初步报告。 ②分离培养。粪便标本接种CCFA选择培养基，挑选典型呈粗糙的黄色菌落，转种庖肉培养基进行纯培养，供做鉴定试验和毒素测定。

第三十二章 螺旋体和支原体

螺旋体

1.钩端螺旋体是螺旋体中唯一可进行人工培养的，常用柯氏培养基。不易被碱性染料着色，革兰染色为阴性，常用Fontana镀银染色法镜检。

钩端螺旋体的微生物学检验

①分离培养。钩端螺旋体在培养液中呈云雾状混浊，在半固体培养基上可形成扁平、透明、圆形的菌落。

②鉴定。传代培养后用钩端螺旋体的群和型特异性血清做菌群、菌型鉴定或毒理试验，氧化酶试验阳性、触酶试验阳性、动物试验阳性。

③血清学诊断。目前最常用的是显微镜凝集试验，即用标准株或当地常见菌株做抗原，分别于患者不同稀释度的血清混合，37℃作用2h，然后滴片做暗视野显微检查。一般患者凝集效价在1：400以上或晚期血清比早期血清效价高4倍以上具有诊断意义。

也可采用间接凝集试验，钩端螺旋体特异性抗原致敏的颗粒在玻片上与患者血清中相应的抗体作用，可出现肉眼可见的凝集。此方法灵敏度差，但快速简便。

2.密螺旋体（不能进行人工培养，常用Fontana镀银染色法）

1.直接镜检适用于初期梅毒的检查。

2.密螺旋体的血清学诊断：

①非密螺旋体抗原试验（初筛）。用正常牛心肌的心类脂作为抗原，检测患者血清中的反应素。国际上常用性病研究实验室（VDRL）的玻片试验法。国内常用不加热血清反应素试验（USR）和快速血浆反应素环状卡片试验（RPR），其敏感性和特异性与VDRL相似。

②密螺旋体抗原试验（确诊）。用梅毒螺旋体抗原检测患者血清中的特异性抗体，该试验特异性与敏感性均高。常用方法有：A.荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA‐ABS），为间接荧光抗体法，用用于梅毒的早期诊断；B.梅毒螺旋体抗体微量血凝试验（MHA‐TP），是一种间接血凝试验，其方法简单。