临床微生物学检验4完整版(2)

③培养基。CLSI水解酪蛋白（MH）琼脂为药敏试验的标准培养基，pH为

7.2~7.4，琼脂厚度4mm。

④细菌接种。接种物的准备可采用液体生长法或直接菌落悬液法。用0.5麦氏比浊标准管（1.5×10CFU／ml）校正菌液浓度，于15min内接种完毕。各纸片紧贴在琼脂表面，给纸片中心相距﹥24mm，纸片距平板內缘﹥15mm。

⑤结果解释和报告：接种正确时，细菌生长的平面是连续的而抑菌圈呈均匀的环状。测量抑菌圈直径，参照CLSI标准判断结果。分为三级： .敏感（表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后所达到的血药浓度所抑制或杀灭）， .中介（指测试菌对常规剂量用药后体液或组织中的药物浓度的反应性低于敏感株，但在测定药物浓集部位的体液或高于正常给药量临床上使用有效。）， 耐药（指测试菌不能被在体内感染部位能达到的抗菌药物浓度所抑制）。

⑥（K-B法试验的）实验影响因素（简答题）

A.培养基质量。培养基的成分、pH、深度、硬度和湿度等对结果的准确性由直

接影响。

B.药敏纸片。药敏纸片的含药量是影响抑菌圈大小的重要因素，其次还有药敏纸片的保存方式。

C.接种菌量。接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，加大菌量使抑菌圈减小，相反可使抑菌圈扩大。

D.试验操作质量，接种后贴药片的时间，孵育条件和温度、时间，抑菌圈测量工具的精确度和质控菌株本身的药敏特性是否合格，有无变异等都是影响纸片法药敏结果的因素。

⑦质量控制。采用标准菌株是进行药敏试验质量控制的主要措施。常用的临床药敏质控标准菌株有：金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠杆菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212 或 33186等。标准菌株的抑菌圈应在CLSI允许的预期范围内，超出控制范围应检查原因并及时纠正。每次药敏试验应将标准菌株和待测菌在同一条件下做药敏试验。 8

㈡稀释法：是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作用的体外方法，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法（又分为常量肉汤稀释法和微量肉汤稀释法）。

最低抑菌浓度（MIC）：稀释法所测得的某抗菌药物能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度。

最低杀菌浓度（MBC）：指能杀灭99.9％以上测试菌量的最低药物浓度。

MBC测试的方法有培养基、药物稀释、细菌悬液接种等，与MIC相同，不同之处：当MIC无肉眼可见菌生长管中的菌落数≦最初接种菌落数的0.1％，该管的最低药物浓度即为MBC。

㈢体外联合药物敏感试验的意义：①治疗混合性感染；

②预防或延迟细菌抗生素耐药性的发生； ③联合用药可减少剂量以避免达到毒性剂量； ④联合用药比单一用药时常常效果更好。 抗菌药物联合用药可出现4种结果：

①拮抗作用：两种药物联合作用显著低于单独抗菌活性；即A+B＜A或B ②无关作用：两种药物联合作用的活性等于其单独活性；即A+B＝A或B ③累加作用：两种药物联合作用的活性等于两种单独抗菌活性之和；即A+B＝A＋B

④协同作用：两种药物联合作用显著大于其单独作用的总和。即A+B＞A＋B

㈣联合抑菌试验

棋盘稀释法是目前临床实验室常用的联合抑菌定量方法

棋盘稀释法部分抑菌浓度（FIC）指数的判断标准：

FIC指数﹤0.5为协同作用；

FIC指数在0.5~1为相加作用；

FIC指数在1~2为无关作用；

FIC 指数﹥2为拮抗作用。

第九章

1.干粉培养基的质控程序：

①原料的挑选（挑选各成分较稳定的试剂，各种化学试剂一般选用分析纯）； ②配制过程（严格按照标准操作程序手册要求进行）；

③培养基的一般质量控制（包括：外观、无菌试验、培养基的量、培养基的pH、性能试验）。

培养基的一般质量控制：（简答题）

A外观：液体培养基应澄清、无混浊，固体培养基应无菌落生长，不干裂。

B.无菌试验：培养基制作完成后，应检测每批培养基的灭菌效果。无菌生长为合格。

C.培养基的量：斜面培养基的长度为试管长度的2/3，MH平板的厚度应为4mm，其他平板厚度一般为3mm。

D.培养基pH：配制好的培养基pH应与规定的pH相差±0.2以内。

E.性能试验：每一批新配制的、新购入的培养基，均应用已知性质的标准菌株进行预测。合格者方可使用。

2.灭菌器用温度记录装置，或者用生物指示剂嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7953和ATCC12980的培养液或菌片（含菌量为5×10^6 CFU∕片），化学指示剂等监视灭菌效果。

环氧乙烷消毒器使用枯草芽孢杆菌ATCC9372为生物指示剂。

3.生物安全水平及适用范围

实验室的生物安全水平（BLS）是根据实验室内实验对象的危险度评估，而采取的不同程度的生物安全防护措施，以保证实验室工作人员的安全和环境免受污染。 目前BLS分为4级：

一级生物安全防护实验室（BSL‐1）是微生物的基础实验室，进行实验用的都是最低等级的污染物或安全的微生物，完全符合标准实验室操作，如枯草芽孢杆菌；

二级生物安全防护实验室（BSL‐2）适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物，属于第三类病原微生物的如：沙门菌属、乙型肝炎病毒等的实验操作。

三级生物安全防护实验室（BSL‐3）的操作对象一般是可以经呼吸道传播的危险微生物，如：结核分枝杆菌，伯氏柯克斯菌。

四级生物安全防护实验室（BSL‐4）进行试验研究的物质是一些非常高危险性并且可以致命的有毒物质，可以通过空气传播并且现今并没有有效的疫苗或者治疗方法来处理。如（出血热病毒）

第十章

1.医院感染（NI）：又称医院获得性感染，指在医院内获得病原体并发生的一切感染，即只要感染因子来源于医院，就可以算作医院感染。入院48h后发生的感染通常认为是医院感染。

医院感染包括：①在住院期间获得感染并且发病；

②在住院期间获得感染而在出院后才发病的感染。

③探视者和医疗结构的工作人员在医院内获得的感染。 ④入院48h后发生的感染通常认为是医院感染。

医院感染不包括：

①入院前已存在的感染；

②住院前获得的感染，入院时已处于潜伏期的感染，住院后才发病；

2.医院感染病原体特点： （简答题）

①大多数为条件致病微生物；

②多数病原菌对抗菌药物具有耐药性或多重耐药；

③免疫功能低下患者可以感染多种病原体；

④以细菌及病毒最多见，真菌感染明显增多，新病原体不断出现；

第十一章

1.进行血液细菌培养（血培养）的指征：

①当患者发热（≧38℃）或低体温（≦36℃）时；

②外周血白细胞计数超过10×10^9∕L（特别是存在核左移时），或绝对粒细胞减少（成熟中性粒细胞计数少于1×10^9∕L）；

③合并有明显感染症状体征、伴有感染病灶存在时。怀疑有脓毒血症的患者应尽早进行血液细菌培养。

2.血液标本的采集要求：

①采血时机。理想的血液细菌培养应该是在患者接受抗生素治疗之前进行，故采集血培养应尽可能在患者寒战或发热前；

②采血部位。应行经皮外周静脉穿刺采血（一般采集肘静脉血），穿刺部位的皮肤消毒，严格无菌操作；

③采血份数。对每名患者应至少从不同部位采集血培养2~3份，这样可以提高检测的阳性率。对怀疑 …… 此处隐藏：2471字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……