微生物学实验讲义 - 图文(7)

4. 玻璃器皿

移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 5. 其它物品

药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。

（四）实验步骤

1. 肉膏蛋白胨培养基的配制

1）培养基成分

牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，琼脂1.5～2g，水100 ml，pH 7.2。 2）配制方法

称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量2/3左右的蒸馏水；用玻棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量，然后加入少量蒸馏水，加热溶化，倒入上述烧杯中。将烧杯置于石棉网上加热，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。 调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。 定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。 加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化，补充失水。 分装、加塞、包扎。

高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。

2. 高氏合成Ⅰ号培养基的配制 1）培养基成分

可溶性淀粉2g，KNO3 0.1g，K2HPO4·3H2O 0.05g，NaCl 0.05g， MgSO4·7H2O 0.05g，Fe2SO4·7H2O 0.001g，琼脂1.5～2g，蒸馏水100 ml，pH7.2～7.4。

2）配制方法

称量及溶化：量取所需水量的2／3左右加入到烧杯中，置于石棉网上加热至沸。称量可溶性淀粉，置于另一小烧杯中，加入少量冷水，将淀粉调成糊状，然后倒入上述装沸水的烧杯中，继续加热，使淀粉完全溶化。

分别称量KNO3、NaCl、K2HPO4和MgSO4，依次逐一加入水中溶解。按每100 m1培养基加入0.1％Fe2SO4溶液1ml。

调pH：用1mol/L NaOH溶液调pH至7.4。 定容：将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。

加琼脂：加入所需重量的琼脂，加热融化，补充失水。 分装、加塞、包扎。

高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。

（五）实验报告内容

1. 记录你所配制培养基的名称及成分。

2. 分析你所配制培养基的碳源、氮源、能源、无机盐及维生素的来源。

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（六）思考题

1. 培养细菌一般常用什么培养基? 2. 培养放线菌常用什么培养基? 3. 何谓半合成培养基?何谓合成培养基? 4. 牛肉膏应置于何种容器中称量为宜?

5. 配制高氏合成Ⅰ号培养基时，可溶性淀粉需经什么处理后才能倒入到沸水中?

三、酵母菌、霉菌常用培养基的配制

（一）目的要求

了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。

学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。

（二）基本原理

麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养。

察氏培养基主要用于培养霉菌进行形态观察。麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。

（三）实验材料 1. 药品

葡萄糖、蔗糖、NaNO3、K2HPO4、KCl、Mg2SO4·7H2O、Fe2SO4、琼脂。 2. 仪器

天平、高压蒸汽灭菌锅。 3. 玻璃器皿

移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 4. 其它物品

药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、

新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。

（四）实验步骤

1. 马铃薯葡萄糖培养基的配制 1）培养基成分

马铃薯20 g，葡萄糖2g，琼脂1.5～2g，水100 m1，自然pH。 2）配制方法

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配制20％马铃薯浸汁：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。100℃煮沸半小时，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。121℃灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，存备用。

配制：按每100ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化，并补足失水。

分装、加塞、包扎。

高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。

2. 豆芽汁葡萄糖培养基的配制 1）培养基成分

黄豆芽10g，葡萄糖5g，琼脂1.5～2g，水100 ml，自然pH。 2）配制方法

称量熔化：称新鲜黄豆芽10 g，置于烧杯中，再加入l00ml水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成l0％豆芽汁。

配制：按每100ml 10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化，补足失水。

分装、加塞、包扎。

高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。

（五）实验报告内容

记录你所配制培养基的名称及成分。 （六）思考题

1. 马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基常用于培养哪类微生物？ 2. 何谓培养基的自然pH？

四、高压蒸汽灭菌 …… 此处隐藏：389字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……