革兰氏染色及细菌特殊结构观察

微生物实验

实验二

革兰氏染色及细菌特 殊结构观察2006.03.08

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一、实验目的

学习细菌的革兰氏染色原理和方法

了解细菌的特殊形态结构： 芽孢、荚膜、鞭毛

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二、实验原理 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、

和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行

染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等。

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革兰氏染色 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究

细菌细胞壁的结构

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G-肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂

质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质，增加了细胞的通透性，使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙 黄复染呈红色。 G+细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，

肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细 菌仍保留初染时的紫色。

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细菌的特殊形态结构 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各

种极端环境。 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 鞭毛：运动，菌落形态。

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三、实验材料 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢

杆菌(24h培养物) 革兰氏染色液一套

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四、实验步骤 革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢观察

观看鞭毛、荚膜的示范片 绘图、写实验报告

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革兰氏(Gram)染色法1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸 铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲 去残水，而后用其覆盖涂面1分 钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约15-20秒，后立即 用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染3-5 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。

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枯草杆菌芽孢的观察

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细菌鞭毛的观察

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细菌荚膜的观察

荚膜

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五、实验结果 记录所观察到的三种菌革兰氏染色结果

的差别 记录枯草杆菌Gram染色结果，并判断是

阳性还是阴性

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六、问题与讨论 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意

哪些操作？哪一步是关键？为什么?