小型薄层色谱在药物合成中的使用方法经验总结(2)

(3)荧光薄层板检测：荧光薄层是在硅胶中掺入少量荧光物质制成的板，在254nm紫外灯，整个薄层板显黄绿色荧光，被测物质由余吸收了部分照射在此斑点位置的紫外线，而呈现各种颜色。

(4)在显色剂显色中，用高锰酸钾-硫酸液显色时，配制方法为把500mg高锰酸钾溶在15ml浓硫酸中。注意要少量地慢慢混合，因为锰的七氧化物有爆炸性。结果为在粉底本色上产生白色斑点。

2.62 实验中常见问题

(1)在工作中研究过用硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是温度高于100度时，后改用不加CMC铺的水板来作，就不会有烘糊现象，故也可推论CMC

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易于与硫酸起糊化反应。

(2)虽然改用不加CMC铺的水板来作不会有烘糊现象，但不加CMC铺的板又太软，点样时容易点出洞，办法是：一、将CMC的浓度调至0.1%，这样就不易烘黑的；二、当喷完显色剂后不要在放烘箱里烘，可以用电吹风在板子背面吹吹就能显色了．此法简便、快洁．如果非想使用烘箱烘的话，一定要用带玻璃窗的，当看到显色了就取出，不然不好控制显色时间，时间过长，CMC容易碳化变黑.另还要注意显色剂，如果显色剂中含有硫酸，加热时间一定要掌握好，不可太长。一般实验室常用带有石棉网的电炉加热。

(3)这里要区别板烘糊和样品烘糊两个概念，样品烘糊是也是一种显色方法。如糖类加热后会碳化，便于观察。这时对板的要求较高，一般为水板[4]。

2.7 关于裂板：

(1)板子会裂口，一则可能是因为硅胶的比例太大，二则可能是板在常温下没有完全晾干，从表面看是干了，但是最中间的没有干，所以在烘箱中活化导致裂口。如果铺完不久就在较高温度下，特别是直接放入105度的烘箱烘，裂板的几率就会更高。

(2)正确的方法是先用低温大约40度左右烘30分钟左右，或在常温下凉几天，然后再用105度活化。

3 薄层色谱应用

(1)用于判断两个化合物是否相同（同一展开条件下是否有相同的移动值）；

(2)用于确定混合物中含有的组分数；

(3)用于为柱色谱选择合适的展开剂，监视柱色谱分离状况和效果；

(4)用于检测反应过程；

(5)商品化薄层板可用于半定量分析；

(6)确定适宜反应温度和时间。

4 值得进一步探讨的问题

4.1黏结剂

粘合剂分为无机粘合剂和有机粘合剂：

无机黏结剂——石膏（硫酸钙），无机黏结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄层强度差。

有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。

因此希望能找到一种粘合剂，在配置时具有有机和无机粘合剂的优点，同时匀浆不易凝固，且能用浓硫酸显色。

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4.2 TLC在实际应用中也受到很多条件制约,下面根据实际应用薄层色谱的经验来做出具体说明。

(1)薄层色谱适用于挥发性较小、在空气中比较稳定的物质,象苯胺、甲苯等易挥发物质和重氮盐等易分解物质不适用此法分析,但此类物质并不影响薄层色谱的应用;有时对重氮盐也可进行定性分析,要看实际应用中所需要达到的目的。另外如果原料和产物均为无色且在紫外光照射下也无吸收的物质,如十二烷基磺酸钠、丙三醇等非芳香族物质也不适合用此法分析。

(2)能够用薄层进行分离的物质应满足一定的条件。两个物质Rf值之差应不小于0.1;例如在燃料合成中：染料分子量大部分在600到1200之间,属于大分子,但不属于高分子;中间体分子量一般都在90～400之间,前后产物一般在Rf值方面都会有较明显的变化(分子量仅是Rf值的影响之一)，而且因为染料是有色物质,很多情况下,即使Rf值相同也可根据颜色判断反应的程度 ,这是用薄层色谱检测染料合成的最大优点。染料合成属于有机反应,每步反应通常在1小时～5小时,不同品种的不同步骤差别很悬殊。而用TLC法检测染料合成终点通常在20分钟～30分钟之间,个别情况下时间更短,不会影响工作进度。因此利用薄层色谱法研究反应情况是可行的。

(3)一般文献介绍薄层色谱的应用时,点样使用毛细管,但在实际操作中发现,这对操作水平要求比较高,动作慢或操作不当对分析时间有影响。这是因为,为了在板层上点出大小均匀的斑点,每次吸取的量应当保持大致相同,这要求用毛细管吸收的溶液在管中保持相同的高度,前提是毛细管粗细必须相同,如果不同,更难达到要求。如果让毛细管达到饱和吸收状态,即底端接触液面,直至溶液在毛细管中停止上升为止,再取出毛细管。这样虽然每次取的量可以定量,但在板层上会留下较大的斑点,对板层展开距离的要求就要提高,否则不能对两个似分未分的斑点做出准确的判断。若是不将毛细管中所有溶液都点在板层上,就又存在了管中液面下降高度差的问题,这比吸收溶液的操作更难把握。因为在点样的瞬间,既要使溶液点到板上,又不能把板层上的硅胶扎破,是一项难度较大的操作,扎破硅胶容易导致展开的斑点拖尾而影响判断。因此,极易因点出一个大斑点而使刚点的其他符合要求的斑点变得失去意义,有时在点到最后一个斑点时,常常因为紧张而前功尽弃。如何解决这个问题还要经过实践来检验。通过试验,在点样过程中弃用传统的毛细管点样法,改用直径在112mm～118mm的细玻璃棒来点样,基本可以解决上述问题。现简述如下:普通的玻璃加工操作即可获得所需的细玻璃棒;取样量易控制,只需垂直接触液面,再即刻取出就可以点样;操作熟练以后,还可倾斜接触液面,对取样量进行控制。点样时,将玻璃棒顶端呈半球状的液面接触板层表面即可,玻璃棒本身不必触及板层表面;用过的玻璃棒经过简单清洗可立即再次使用,环保和经济性能强于毛细管。

(4)薄层色谱有边缘效应的问题,受气温、湿度等的影响也比较大。即使前期工作都顺利完成,在展开过程中仍然可能因为斑点的移动路径倾斜而影响判断。见图1(实际照片)。在实践中发现,倾斜的角度和原点离边缘的远近有关,离边缘越近倾斜角度越大,点在中间的斑点几乎不倾斜。因此,最简单的办法就是使用宽板,然后在靠近中间的位置点上斑点。但是这样做不仅浪费板,而且没有真正去除边缘效应的影响,只是减小了影响。可行的办法是在裁剪硅胶板的过程中注意剪刀的使用技巧,而且剪好后待使用的板最好半密封,既不要完全暴露在空气中也不要放入干燥器。有文献建议完全密封,放入有蓝色硅胶的干燥器中,但是结合实际考虑,在合成中应用不是很方便,也确实没有必要;若是应用在分析等要求严格的方面,这样做还是必要的。剪好后的板尽量在3日内使用,否则硅胶板的边缘效应更强,而且吸收实验室空气中的复杂成分后,会使硅胶板表面变黄,甚至在紫外灯下可以显色。

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(5)本文的介绍重点在于实际操作和经验总结,关于薄层色谱的理论研究有书籍作过详细介绍,本文不涉及。此外,在展开剂选择方面,有文献介绍了不同种类的样品使用不同的展开剂 ,建议在工作、研究中根据实际需要进行选择,有时候可以把一些常用的展开剂比例稍微变化以后再应用。有些其他不溶于水的有色物质的合成,如有机颜料的合成也可以使用薄层色谱法来控制终点。总之,要充分发挥薄层色谱灵活多变的特点[1]。

5参考文献

[1]周鑫.薄层色谱在燃料合成中的应用实例[A].China Academic Journal Electronic Publishing Home.2007，44(6):50-53.

[2]李振江.小型薄层色谱技术及其在脂肪衍生多元醇合成反应监控中的应用.新疆工学院学报.2000,21(2):104 …… 此处隐藏：1689字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……