小型薄层色谱在药物合成中的使用方法经验总结

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小型薄层色谱在药物合成中的使用方法经验总结

薄层色谱法(TLC,thin-layer chromatography)是一种在铺成薄层的固体上进行的平面色谱方法, 由俄国学者N·A·Izmailov等在1938年首次报导。但直到1956 年德国学者E1Stahl较完整地发展了这个方法,TLC才得到广泛重视和研究,成为色谱法的一个重要分支,处于活跃和发展状态。EStahl因此项工作获得IUPAC的Talanta(分析化学)大奖。薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)具有相同的分离原理,是依据不同物质在流动相与固定相之间的吸附和解吸速率不同来进行物质的分离。薄层色谱与纸色谱、柱色谱等属于传统分析;高效液相色谱、质谱、气谱等属于仪器分析。随着时代的发展,仪器分析渐渐取代传统分析,现已成为主流。仪器分析在精密性、准确性、连续性、重现性等方面,有着传统分析达不到的优点。例如定量分析多组分有机混合物,或者在有标准品的情况下确定未知物时, HPLC法与TLC法比较,具有准确度高、重现性强的优点。但是和传统分析比较,仪器分析主要的弱点就是不灵活,必须按照固定的程序操作,更改条件比传统方法繁琐得多。其次是成本高的问题,先期投入大、人员培训周期长、运行维护的人力、物力费用高。相反,这些正是传统分析的优点。因此,在普通的有机合成、精细化工实验室,传统分析仍不可完全被代替,其优势在于灵活多变、应用方便、成本低廉。TLC法有着悠久的历史,随着经济发展,对外交流增多,很多实验室已采用商品化的薄层板,如涤纶片基硅胶板。商品化硅胶板和自制硅胶板相比,具有性能稳定、重现性高的特点,可进行半定量分析[1]。

总之，与经典的柱上色谱,常用的气相色谱、纸上色谱,以及较近发展起来的高效液相色谱比较,TLC有以下特点:1) 设备简单,操作方便;2)快捷,展开时间短;3)可采用多种固定相及显色手段,方法多样而高效;4)可广泛选择流动相;5)检出灵敏度高,一般可达10-10g以下;6)样品量适用范围大；7)技术多样化, 特别是二维展开、浓度梯度展开等,展开机理亦有吸附、分配、离子交换、电泳、等电聚焦等多种,可联合采用数种手段,为其它色谱技术所不及。以上是TLC的长处,但应当指出,TLC在自动化程度及分离效果上比气相色谱和高效液相色谱稍差,分析特别复杂的样品有时有困难,也不适于挥发性样品的分析。近年来,发展了高压TLC、高效离心TLC、圆柱TLC、等离子检出等新技术,TLC在自动化和高效方面已达到与高效液相色谱同等的水平。小型薄层色谱(m-TLC)技术作为合成实验中的常规监测手段以及TLC和其它色谱技术的前导技术发挥着重要作用。m-TLC技术细节的掌握和未知

[2]体系技术参数的确定是m-TLC应用于新的反应体系的关键。

1 薄层色谱的制作

1.1 使用的化学药品和仪器有:

(1)化学药品: 使用的主要化学药品列于表1。

(2)仪器:m-TLC仪器一套,自备包括m-TLC基板,展开槽,显色槽。

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1.2 m-TLC薄层板的制备

(1)将(2.5×7.5)cm2载玻片依次用水和乙醇洗净，晾干。要求玻片无划痕, 水膜均匀,完全洁净。置玻片于80℃烘箱干燥,转入干燥器冷却至室温,备用。

(2)用110g硅胶-G配2.5mLCMC-Na水溶液(0.50%,w/w)调制硅胶糊(slurry)。

(3)将硅胶糊均匀涂于(2.5×7.5)cm2载玻片上,每块载玻片约用0.2～0.4g硅胶(干重)。保持薄板水平,令其自然干燥1～2d。其间保持薄板洁净。

(4)将薄板放入110℃烘箱活化30min。

(5)将薄板转入干燥器,令其自然冷却至室温,备用。

2 薄层板制备的常见问题及解决方法

2.1关于配制CMC-Na：

CMC-Na是一种高分子材料,而高分子材料的溶解必然都会有一个溶胀、溶解的过程,所以配制的时候,应该将称好的CMC-Na逐量的撒在水的表面,让其自然沉降,注意要散开平铺,这样能够充分浸润,使其溶胀,之后可以置于水浴锅内加热溶解,当然如果你不是很急着用的话也完全可以直接用水泡着放一边,泡个几天也是可以用的。以下是配置CMC-Na过程中需要注意的方面：

(1) 先将称好的CMC-Na加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入。这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.0.5%CMC-Na与水如果不好溶涨，可在溶涨前加几滴乙醇，比较好溶，但是尽量不加，因为加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。而且放置时间太长的CMC-Na溶液可能会发黄，如果有霉菌出现，绝对不能再使用。

(2)CMC-Na溶液的浓度0.3%-0.7%比较合适，实际操作中0.4％～0.5％最为实用，浓度高了，将来显色时,如果有加热过程稍不小心板子容易发黑;浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时如果紧张，容易出洞。

(3)在CMC-Na的溶解过程中，可以使用有加热操作功能的磁力搅拌器，大概搅拌5小时，应该可得到满意的效果。而且这样就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清。如果有抽滤装置你可以直接把CMC-Na溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了，这样做还有两个好处：一是节省CMC-Na溶液，二是倒滤过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来。过滤CMC-Na溶液的办法，在布氏漏斗上平铺薄薄一层脱脂棉（保证每个小孔都没漏掉），用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以倒CMC-Na溶液了，要保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。关于CMC-Na的后处理，过滤，或者抽滤都可以，有的实验者觉得可能速度很慢，而且又容易浪费。所以采用的做法是离心，5000rpm离心20min。倒出上清液，上清液非常清，也同时消除了过滤过程中可能发生的污染。下面没有充分溶解的CMC-Na。继续加到水中，还可以继续配制使用。另外还有一种处理方法：先将CMC-Na溶解完全,可将其溶解成所需浓度，加热后超声处理,再抽滤,可很快得到上清液。

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2.2 关于薄层板的要求：

(1)载板要求平滑清洁，没有划痕，在使用前可用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净。 判断载板是否洗干净的标准：拿在手上立起来，如果发现水不是呈股流下，而是呈瀑布状态流下，说明玻璃已经洗干净。（真正洗干净的玻璃，很快就可以晾干。）

(2)清洗用过后的薄层板，可用洗衣粉、洗洁净，反复洗数遍，如果仍然挂水珠，可用洗液泡。如果还解决不了那就只好放弃这块玻璃板了。

2.3 关于研磨及铺板要求：

取薄层层析硅胶重量与CMC-Na的体积比为1：4的比例（该比例能使硅胶板铺出的效果较好不至于掉渣也不至于板太硬）充分混合碾磨，至拿起碾锤能看到混合液与碾锤有一定的粘连。即好。

(1)硅胶的研磨，必须是一个方向，可以适量的加入一定量的无水乙醇（10g吸附剂加入3滴95％乙醇）或丙酮来消泡，也可以适当搅拌后放在干净容器内超声。

(2)依据薄层板使用需要，将适量研好的吸附剂倒在薄层板上，先用小锤将吸附剂荡匀，倾斜层析板，使吸附剂流至层析板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜层析板，使吸附剂回流；然后是另外两个方向，重复上述操作，后轻颠几下薄层板即可。

(3)铺板时，给载板倒吸附剂时要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。尤其是载板的四个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。薄层板铺好后一定要放置在平的台面上，否则难保证板面硅胶的厚度均匀。

(4)铺制好的薄层板先让其稍干后,即 …… 此处隐藏：2955字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……