植物生理学实验指导(4)

－

2.2 在第1项观察后，接着从盖玻片的一边滴2滴0.8mol·L1蔗糖液, 在盖玻片的另一边用吸水纸吸盖玻片下的水，将蔗糖液引入盖玻片下浸渍植物材料，并立即镜检，可以看到细胞很快发生质壁分离。先是凹形质壁分离，而后变为凸形质壁分离。

2.3 在第2项观察后，接着在盖玻片的一边加入2～3滴无离子水，在另一边用吸水纸吸去糖液，将无离子水引入盖玻片底，立即镜检可以看到带有液泡的原生质体重新吸水膨大，最后充满整个细胞腔，即质壁分离复原（复原缓慢进行时，细胞仍可正常存活；如果进行很快，则会因原生质机械破坏而死亡）。

2.4 将一片经中性红染色的植物材料放在载玻片上，加一滴无离子水后加盖玻片，在酒精灯火焰上微微加热，然后在显微镜下观察，可以看到细胞质凝结成不均匀的凝胶状，与细胞核一

－

起染成红色。然后按(2.2)法加0.8mol·L1蔗糖液也不发生质壁分离。

一、目的

植物组织中存在有淀粉酶（分α—、β—两种），能将贮藏淀粉水解成麦芽糖。从而影响种子的萌发或植物的生长。本实验的目的在于测定淀粉酶活性并观察环境条件（如温度、pH）及某些化学物质对淀粉酶活性的影响。

二、原理

淀粉酶的活性和其他酶一样，受环境条件的影响，尤其是对温度及pH的变化非常敏感，表现有最适温度和最适pH的现象。在最适温度及最适pH的环境中，酶的活性最强，酶促反应速度最高；低于或高于最适温度和最适pH，酶活性变弱，酶促反应速度降低。

除温度及pH外，某些化学物质可抑制或促进酶的活性。可抑制酶活性的化学物质，称为酶的抑制剂，可促进酶活性的化学物质，称为酶的活化剂。

受环境条件影响后，淀粉酶活性的强弱可用碘试法来检查。

生物w秀w-w专.b心bi做oo.c生om物

实验二 环境条件对淀粉酶活性的影响

顶好的生理试验指导

三、材料、仪器设备及试剂

1. 材料：小麦种子；水稻种子。

2. 仪器设备：恒温水浴；恒温培养箱；试管；150ml三角瓶；研钵；烧杯；移液管；胶头滴管；试管架；温度计。

3. 试剂：系列磷酸盐－柠檬酸缓冲液；pH5.0醋酸缓冲液（按附录二配制）。

I－KI溶液：称取2g KI溶于蒸馏水中，然后加入1g I2 ，待全部溶解后，用蒸馏水定容至300ml，贮存于棕色瓶备用。

0.5％淀粉溶液。 1％CuSO4溶液。 1％KI溶液。

0.1％HgCl2溶液。 1％NaCl溶液。 0.1%AgNO3溶液。

四、实验步骤

1. 淀粉酶的提取

取已发芽的水稻或小麦种子（幼芽长3～4cm）20粒，放在研钵中研磨，匀浆用100ml水分多次冲洗，集中于150ml三角瓶并充分搅拌、静置1小时后，过滤入另一三角瓶，滤液中即含有淀粉酶，若要短期保存时，可加甲苯数滴防腐，并放入冰箱中。 2. 温度对活性的影响淀粉酶

取试管5支，分别作15、30、45、60、75℃温度标记，并注明“酶液管”,各加入酶提取液5ml；另取5支试管，也分别作15、30、45、60、75℃温度标记，并注明“淀粉液管”，各加入0.5﹪淀粉液5ml；然后各管分别置于相对应温度的水浴中，约5min后，待管内外温度一致，将酶液倒入相同温度的淀粉液管中，摇匀并记下时间，10min后取出（不同处理之间，时间要一致），放入冰水中冷却1min后，往每管加入I－KI溶液5滴，摇匀。观察颜色有何不同，比较不同温度对淀粉酶活性的影响，判断最适宜的酶促作用温度。 3. pH对淀粉酶活性的影响：

取4支中型试管，分别加入下列系列pH的磷酸盐－柠檬酸盐缓冲液3ml，并作标记：pH 3.6、4.8、6.0、7.2。每管加入淀粉液3ml和淀粉酶提取液2ml，充分摇匀，记下时间，放置30℃左右温度下20min后，向每管加入I－KI溶液5滴，摇匀，根据生成的颜色，比较淀粉酶的活性。

4. 化学物质对淀粉酶活性的影响

取6支试管，编上1～6号，每管加入淀粉酶提取液1ml及pH5.0醋酸盐缓冲液1ml，然后往1号管加蒸馏水1ml（对照）。2号管加1％NaCl 1ml，3号管加1％碘化钾1ml，4号管中加1％CuSO41ml，5号管加0.1％AgNO31ml，6号管加入0.1％HgCl2（注意，有毒！）1ml，各管再加0.5％淀粉液2ml，摇匀后置于40℃恒温水浴中，并记录开始时间，保温8～10min,取出试管，冷却后向各管加入I－KI溶液5滴，摇匀，观察各管颜色的差异。

五、实验结果记录及分析

生物w秀w-w专.b心bi做oo.c生om物

顶好的生理试验指导

1. 用文字说明经不同温度，pH及各种化学物质处理后各试管所显示的颜色。 2. 用文字简要分析环境条件对淀粉酶活性的影响。

实验三 植物组织中自由水和束缚水含量的测定

一、目的

植物组织中的水分以两种不同的状态存在；一种是与原生质胶体紧密结合着的束缚水，另一种是不与原生质胶体紧密结合而可以自由移动的自由水。自由水与束缚水含量高低与植物的生长及抗性有着密切的关系。自由水/束缚水比值较高时，植物组织或器官的代谢活动一般比较旺盛，生长也较快；反之则较慢，但抗性常较强。因此，自由水和束缚水的相对含量可以作为植物组织代谢活动及抗逆性强弱的重要生理指标，故在植物生理的研究上常需测定。本实验的目的在于掌握自由水与束缚水含量的测定原理及方法。

二、原理

植物组织在与高浓度的糖液接触时，束缚水因被原生质胶体颗粒吸附而留在组织中；自由水则因未被原生质胶体颗粒吸附而顺着水势梯度外渗到糖液中，使糖液的浓度降低。组织浸泡在糖液中一定时间后，根据糖液浓度降低的情况可算出组织中自由水的含量，而束缚水含量则可通过烘干植物组织计算出总含水量，再减去自由水含量而求得。

三、材料、仪器设备及试剂

1. 材料：马铃薯；田间生长的任何植物。

2. 仪器设备：称量瓶；打孔器（直径0.5cm）；阿贝折射仪；手持糖量计；电子分析天平；快速水分分析仪；恒温烘箱。

3．试剂及配制：蔗糖溶液（60～65﹪）。称取蔗糖60～65g, 溶于40～35ml蒸馏水，搅拌均匀即可。 四、实验步骤

1. 植物组织中自由水含量的测定

1.1 取称量瓶3个（三次重复），依次编号并分别称取瓶重。

1.2 选取生长一致的植物数株，并取部位、长势、叶龄一致的有代表性的叶子数片，用直径为0.5cm打孔器钻取圆片（注意避开粗大的叶脉），每瓶随机装入50片，立即加盖，并称取被测样品鲜重。

如果被测植物是块茎（马铃薯），则先用打孔器钻取圆条，然后切成约1㎜ 厚度的圆片，每处理称取1～1.2 g圆片(按实际称重记录)。

1.3 各瓶迅速加入60—65％的蔗糖溶液5ml左右（注意摇匀，不能让圆片重叠在一起），并

生

物w秀w-w专.b心bi做oo.c生om物

顶好的生理试验指导

生物秀-专心做生物

称取每瓶糖液重。

1.4 把瓶放在暗处4—6 h（若实验用植物块茎如马铃薯则处理1 h左右，不需放在暗处），其间经常轻轻摇动。

1.5 到预定时间后，充分摇动糖液。然后用手持糖量计或阿贝折射仪（使用方法见附录）测定各瓶糖液的浓度（％）及原来糖液的浓度（％）。所测得的糖浓度按表1或表2进行校正，再按公式（2）计算植物组织自由水含量。 2. 植物组织总含水量的测定 （介绍两种方法） 2.1 烘干称重法

2.1.1 取称量瓶3个，依次编号，分别称取空瓶重。

2.1.2 取上述相同的植物材料，用打孔器钻取圆片。立即放入称量瓶中（每瓶随机取样放50片），加盖，准确称出被测样品鲜重（如果被 …… 此处隐藏：1880字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……