德州地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及灭活疫苗免疫保护效力研究(4)

德州地区副猪嗜血杆菌的分离峪定及火活疫茁保护效力研究

菌株在遗传上同源（不同于分离自全身性组织的细菌），并且以血清３型和不能分型的菌株占多数。

３．１荚膜

荚膜抗原成分主要足多糖和磷壁酸，具有型特异性。据Ｌｉｔｔｌｅ以及Ｍｏｒｏｚｕｍｉ和Ｎｉｃ０１ｅｔ报道，分离自健康猪上呼吸道的大多数ｌｉＰｓ都有荚膜，而从其他部位分离的菌株以无荚膜的占多数。但是，通过活体内传代的方法可筛选出荚膜化的ＨＰｓ克隆，而在培养基上经多次传代后有荚膜细菌的数量减少。荚膜与其毒力之间的直接关系还有待进一步研究。

３．２脂多糖

菌体结构抗原包括外膜蛋白（Ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｏｒｔｅｉｎ，ＯＭＰ）和脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈｒｉｄｅ，ＬＰＳ）。ＬＰＳ可能是一个主要的毒力因子，血清ＬＰＳ似乎与ｊｆＩＬ栓形成、血管内凝集物的传播密切相关，其产生的超氧化物歧化酶有助于抗吞噬。Ｚｕｃｋｅｒ等研究了副猪嗜血杆菌合成的脂多糖，发现有毒力菌株和无毒力菌株的脂多糖成分相似。副猪嗜血杆菌经活体内传代后形成纤毛样的结构，但从表面健康猪的鼻腔中普遍能分离出这种细菌提出了这样一个问题：是否粘附于门户部位的经典概念是细菌入侵开始的先决条件。

３．３外膜蛋白

外膜蛋白（ＯＭＰ）与ｔｉＰｓ的毒力有关，健康仔猜与患病猪分离到的ｌｉＰｓ的ＯＭＰ不同，由多发性浆膜炎和关节炎症状的猪分离的ｔｉＰｓ的ＯＭＰ基本相同。应用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ技术发现，副猪嗜血杆菌的外膜蛋白（ＯＭＰ）具有２个完全不同的生物型：即生物１型和生物２型。由健康猪鼻黏膜分离到的菌株表达的是生物ｌ型ＯＭＰ，包括两个蛋白，其分子量一为约６８ｋｕ，另一蛋白的分子量在２３．－一４０ｋｕ之间。由副猪嗜血杆菌病病猪分离到的菌株通常含生物２型ＯＭＰ，其以约３７ｋｕ的优势蛋白为特征。后来，０１ｉｖｅｉｒａ平ＨＰｉｊｏａｎ通过全菌蛋白组分计算机分析证实了这些发现。

Ｍｃｖｉｃｋｅｒ等在副猪嗜血杆菌中发现了两个与流感嗜ｊｆＩＬ杆菌具有同源性的外膜蛋白Ｐ２矛ＨＰ５，该蛋白与细菌黏附有关，在毒力株和非毒力株中Ｐ蛋白的大小有所不同，在毒力株中为４８ｋｕ，而在非毒力株中却为５５ｋｕ，可通过Ｐ２蛋白来区分毒力株和非毒力株。

１ＩＩ东农业大学硕Ｉｊ专业学位论文

３．４菌毛

Ｍｕｎｃｈ等证明，副猪嗜血杆菌在体内传代后能够生成菌毛样结构，但其致病作用不清楚。研究表明，ＨＰｓ血清５型Ｎａｇａｓａｋｉ株（从患脑膜炎病猪中分离），能够以非常高的水平黏附并侵入猪脑微血管内皮细胞（ＰｏｒｃｉｎｅｂｒａｉｎｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌＳ，ＰＢＭＥＣ），电镜照片也证实了这种能力。比较从脑膜炎或肺炎病猪中分离的不同血清型ＩｔＰｓＸ寸ＰＢＭＥＣ的黏附和侵袭水平，发现血清４型和５型比其他血清型具有较高的黏附能力。抑制试验结果表明，ＨＰｓ侵袭ＰＢＭＥＣ需要肌动蛋白微丝和微管骨架重排，蛋白侵袭素在ＨＰｓ进入ＰＢＭＥＣ的过程中似乎并没有起到主要作用。侵袭血脑屏障的内皮细胞可能是ｔｔＰｓＺｊＩ起肺ｉ月莫炎的原因。

３．５转铁蛋白

铁是细菌生长不可缺少的元素，但是由于宿土糖蛋白、转铁蛋白和乳铁蛋白的络合作用，细菌外环境的铁含量很少。转铁结合蛋白（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｂｉｎｄｉｎｇｐｏｒｔｅｉｎ，ｔｂｐ）能够特异的捕获宿主的转铁蛋白，并将铁转运到细胞浆中，以提供细菌生长。Ｃｈａｒｌａｎｄ等证明猪血清中转铁蛋白受体的存在，并分析两种转铁结合蛋白（ｔｂｐ）的多肤结构。转铁结合蛋白由两种不同的蛋白构成，即转铁结合蛋白Ａ（ｔｂｐＡ）和转铁结合蛋白Ｂ（ｈｔｐＢ），它们对宿主的转铁蛋白具有特异性。ｈｔｐＡ很可能是一种穿膜蛋白，而ｈｔｐＢ靠Ｎ端脂肪酸残基镶嵌在外膜上，以提供细菌生长所需。通过ｔｂｐＡ和ｔｂｐＢ的协同作用，捕获宿主的转铁蛋白，通过ｔｂｐＡ把铁运送到外膜内并被胞浆周围的铁结合蛋白所结合。在ｔＰｂ的上游还有两个共转录基因ｅｘｂＢ、ｅｘｂＤ，表达产物ＥｘｂＢ、ＥｘｂＤ对于利用来自猪铁转运蛋白的铁必不可少。ｔｂｐ在ＨＰｓ感染宿主动物以引起发病起到决定性作用。３．６神经氨酸酶

神经氨酸酶是巴斯德菌科其它细菌的一种潜在的毒力因子，Ｌｉｃｈｅｔｎｓｔｅｉｇｅｒ和Ｖｉｍｒ的研究表明，９０％以上的田问分离菌株都产生神经氨酸酶（唾液酸酶），这种酶与透酶和醛缩酶协同作用，通过夺取宿主细胞的碳水化合物而增强细菌毒力。除了对营养方而的影响以外，神经氨酸酶还介导清除与宿主细胞糖原结合的唾液酸，暴露出细菌与宿主细胞糖原结合的唾液酸，从而暴露出细菌定居或侵入宿主细胞所需的受体，并通过

德州地区副猪嗜血杆菌的分离豁定及火活疫苗保护效力研究

降低粘蛋白的粘性从而干扰宿主的防御系统。

４致病机理及病理变化

副猪嗜血杆菌病以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征，而不具多发性浆膜炎的急性副猪嗜血杆菌性肺炎也有报道。副猪嗜血杆菌经常引起急性败血症，并且其内毒素可引起弥漫性血管内凝血，导致多个器官内形成微血栓。肉眼可见的损伤主要是在单个或多个浆膜面，可见浆液性和化脓性纤维蛋白渗出物，这些浆膜包括腹膜、心包膜和胸膜，这些损伤也可能波及脑膜和关节表面，尤其是腕关节和跗关节。在显微镜下观察渗出物，可见纤维蛋白、中性粒细胞和较少量的巨噬细胞。副猪嗜血杆菌也可能引起急性败血症，在尚未出现典型的浆膜炎时就呈现发绀、皮Ｆ水肿和肺水肿，甚至死亡。另据报道，副猪嗜血杆菌还可能引起筋膜炎和肌炎，以及化脓性鼻炎。Ｈｏｅｆｌｉｎｇ报道了原代ＳＩ，Ｆ母猪群与副猪嗜血杆菌相关的急性筋膜炎和肌炎，其中一头母猪发生急性化脓性下颌淋巴结炎，其炎性反应已波及咬肌肌束的肌外膜和肌内膜，咬肌和面颊部的浆液性纤维素性分泌物中含有大量中性粒细胞，淋巴细胞和巨噬细胞，并从中分离出副猪嗜血杆菌。ＳＰＦ猪经ｎ乎吸道感染后１６ｈ，精神变得沉郁，直肠温度稍ｕＬ高；３６ｈ后不愿行走：攻毒后６０～７０ｈ出现关节肿胀，粘膜化脓性渗出，随后卧地不起；攻毒８４～１０８ｈ后出现死亡。最早在攻毒后１２ｈ即可观察到肉眼病变，以中等量的胸水、腹水和心包液为特征；在攻毒后３６ｈ胸水、腹水和心包液中出现纤维块；在攻毒后９６ｈ和１０８ｈ剖检发现胸腔，腹腔和心包内含有大量机化的纤维素性化脓性分泌物。ＳＰＦ猪实验性感染后的血液学变化和微观病变表现为在感染后２４ｈ开始出现白细胞减少症，血糖下降，并且所有接种猪的凝血时间延长，纤维蛋白原一纤维蛋白性降解产物增加。从攻毒后１６ｈ开始血浆中检测出内毒素，并且在死亡前内毒素的浓度急骤上升。攻毒１６ｈ后从所自．接种猪的血液中分离到副猪嗜血杆菌。由于在肾脏、肝脏和肺脏中发现微血栓，研究人员推测弥漫性血管内凝血和内毒素性体克加重了具有败血症的仔猪的临床症状并加速其死亡。

为了阐明副猪嗜ＪｆＩＬ杆菌感染的发病机理，研究人员对人工接种模式进１６

ＩｌＩ东农、ＩＥ大学硕卜争业学位论文

行了改进。Ｖａｈｌｅ等人对剖腹产初乳缺乏猪鼻内接种猪嗜血杆菌的有毒菌株，观察此后的一系列反应。接种后１２ｈ即从鼻窦和气管内分离出了副猪嗜血杆菌；接种后３０ｈ，血液培养物中可以分离出该菌；接种后３６６． …… 此处隐藏：2675字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……