体外受精与胚胎移植技术临床进展_百替生物(2)

仍有资料偏好共同培养，认为其效果更好，特别是在一些实验性研究中仍可采用。

体外受精与胚胎移植技术临床进展

卵母细胞浆内单精子注射受精（ICSI）

ICSI最初应用于严重男性不育。目前的资料仍然提示从睾丸获得的精子进行ICSI后的成功率较一般ICSI的成功率为低，可能与精子的成熟程度的差异或染色体异常有关。由于ICSI在克服受精困难中的明显效果，其应用范围有逐渐扩大的趋势，包括既往常规IVF受精失败、不明原因不育等，甚至有的对于年龄大于38岁的妇女直接使用ICSI。有的作者在卵子数目较少时为了保证受精，亦采用ICSI。但Bhattacharya[12]近期报导ICSI对非男性因素的治疗却没有优越性。目前，对ICSI的安全性的担忧越来越多，也有更多的资料提示ICSI可能带来的问题。一些前瞻性研究认为，畸形精仍然以常规IVF为首选的治疗方法[13]。因此，应该在有明确的受精障碍的证据的情况下使用ICSI，ICSI并不能够提高无ICSI指征的辅助生殖技术的成功率；此外，应该有一定的遗传筛查技术作为支持。根据目前对“ICSI可能将与不育相关的遗传缺陷强行传递到下一代”这一问题的认识，目前通行的ICSI前仅进行染色体核型的筛查可能仍然是不够充分的，有可能忽略了许多与精子生成障碍有关的基因微缺失等问题。建议有关方面组织力量，调查国人的与精子生成障碍有关的遗传缺陷的高发原因，建立必要的遗传筛查手段和规范。

对常规IVF受精失败再次ICSI（lateICSI）受精的技术，其最终妊娠率很低。其原因在于卵子老化或与种植窗不同步，目前许多中心已放弃使用。

1995年Fishel首次报导圆形精细胞卵浆内注射(ROSI)受精获得妊娠成功，曾轰动一时，但由于确认精细胞困难以及未成熟精子受精可能带来的问题难以估计，因此其受关注的程度逐渐下降。

-implantationgeneticdiagnosis,PGD)胚胎植入前遗传学诊断(Pre(Pre-

PGD指在胚胎植入之前的阶段对配子或胚胎进行遗传学的检测，将诊断为无遗传性疾病表型的胚胎移植入子宫后建立妊娠，从而防止遗传病患儿的妊娠和出生。PGD的概念最早于1967年由Edward和Gardner提出。首次的妊娠成功于1990年分别由Handyside[1]和Verlinsky[2]报道。估计目前全球已超过50多个中心建立了PGD技术，大约已进行了5000个PGD临床治疗周期，诞生了超过1000个正常婴儿。国内首例PGD婴儿于1999年由中山大学附属第一医院报道。约于2002年中进行的初步统计显示中国内地已有6个辅助生殖中心建立了PGD技术，共完成80个治疗周期并获得19例的临床妊娠，成功率为23.8%，当时已分娩12个正常的婴儿，全部均实现了PGD的目的。

PGD的应用范围包括单基因性疾病、染色体易位和非整倍体、运动性疾病如舞蹈病、有遗传倾向的常见病、先天性异常。近年来对某些非疾病性的植入前诊断亦有增加，如高龄相关的非整倍体的检测、在有β-地贫和Fanconi贫血等需长期输血疾病的家庭进行植入前诊断的同时进行HLA配型，以利于脐血干细胞或骨髓干细胞移植来治疗现存患儿。美国芝加哥生殖遗传学院报道的2248个PGD周期中这类非疾病性的PGD的比例超过10%（不包括高龄相关的非整倍体的检测）。

PGD是产前诊断的一种补充措施。技术过程主要包括极体或卵裂球或滋养外胚层细胞的活检和单或数个细胞的遗传学诊断。以卵裂球活检为例，在胚胎6~8细胞阶段，使用激光、机械或化学消化等方法在透明带上打孔，再使用平口针吸出胚胎内的细胞。对获得的单或数个细胞的遗传学诊断技术主要包括单细胞PCR和荧光原位杂交（FISH）及其由PCR和FISH衍生的一系列技术。PCR技术主要用于单基因疾病的诊断如地中海贫血、进行性肌营养不良、囊性纤维病等。由于模板量少，存在等位基因缺失、扩增失败以及污染等问题。针对这些问题，目前认为活检2个细胞，应用荧光PCR、双重或多重PCR以及PCR扩增时增加等位基因的标记物如与扩增基因相连的LinkedShortTandemRepeat(STR)或扩增位点内的SingleNucleotidePolymorphisms(SNPs)以降低等位基因缺失率。另目前还有报道应用计算机辅助突变分析进行碱基对的微测序，可在不清楚特殊突变点和基因型的情况下进行，从而扩大了PGD的应用范围。而FISH主要用于染色体疾病的诊断。染色体的非整倍体检测可增加妊娠率，降低自然流产率，避免了非整倍体的妊娠。同时分析8条染色体包括X,Y,13,15,16,18,21,22可显著性增加妊娠率，降低自然流产率，染色体异常的妊娠比预期的降低4倍半。其应用范围也有所增大。

体外受精与胚胎移植技术临床进展

如土耳其报道的446个PGD周期中高龄妇女占45.1%，反复IVF失败17.4%，反复自然流产10.8%，染色体异常10.5%，严重男性因素9%，严重配子形态异常如大头精7.2%。但其中对反复IVF失败的疗效有待于进一步评估。

PCR和FISH均可用于性连锁疾病的性别鉴定。而FISH能进行特异染色体的检测，不易受污染的影响，在进行性别鉴定时有其优势，但存在杂交失败或信号过弱的可能。随着人们逐渐发现人类胚胎中高比例的染色体嵌合型，单个卵裂球是否可以代表整个胚胎已经开始令人质疑。因此，在进行临床PGD时分别地对两个细胞进行诊断较一个细胞为好。而且由于染色体嵌合型及等位基因脱扣（ADO）等问题，诊断的准确率难以达到100%[3]。目前仍建议对于PGD后的妊娠进行产前有关筛查。

生物芯片或微阵列（microarray）技术也开始应用于染色体异常的PGD中。如Matrix-CGH微阵列即应用经典的比较基因组杂交技术，不同之处是首先应用激光对分裂中期的染色体进行微切割，然后用DOP-PCR扩增、纯化和固定整条染色体，最后进行定量分析。另外，利用微阵列进行RNA扩增在单个卵子和胚胎中可检测超过8000个基因，从而可用于研究不同基因表达在胚胎不同发育阶段的变化，而最后达到诊断和治疗疾病的目的。

还没有足够的资料说明表明PGD的安全性如是否会导致先天异常的发生。

PGD技术还有待发展，但其在优生优育中蕴含的巨大潜力是不可低估的。随着人类对疾病基因的深入了解以及诊断技术的提高，PGD的应用将越更为广泛，经过长期的努力将某些遗传病从人类中筛选出去的希望依然存在。

卵母细胞的体外成熟（InVitroMaturation，IVM）

为了保证辅助生殖技术的成功率，通常需要获得多个卵母细胞。但是控制性超排卵的近、远期问题特别是一些严重的并发症已引起人们的广泛重视，如在多囊卵巢综合征（PCOS）的患者的超排卵过程中频发卵巢过度刺激综合症（OHSS），不仅会影响辅助生殖技术的成功率,严重者甚至会危及患者生命。另一方面约有10%的患者在控制性超排卵中因为卵巢反应低下无法获得足够的卵子而不得不中断治疗。此外，一些不能接受超排卵治疗而有生育要求如乳腺癌、卵巢癌术后的患者，也无法进行常规的辅助生殖技术。卵母细胞的体外成熟可为解决这些难题提供手段。

IVM的大致过程是：于卵泡期使用小剂量Gn刺激后，卵泡直径达到5-12mm时，在阴道B超引导下，采用双腔针低负压穿刺卵泡抽吸取卵，并以磷酸缓冲液（BPS）冲洗卵泡1-2遍，将卵泡穿刺液及冲洗液收集，然后在解剖显微镜下寻找卵丘复合体（Oocyte-cumuluscomplexes,OCCs），在将剩余液体转移到Em-ConFilter中用37℃卵泡冲洗液反复冲洗以去除红细胞和一些小的细胞碎片，待卵泡液冲洗清亮后再在解剖显微镜下仔细查找OCCs。所找到的全部OCCs在成熟培养液中清洗3~5遍后，在成熟培养液中培养36小时后，当观察到第一极体排出时认为卵母细胞发生核的成熟。为保证受精率，所有排出第一极体的成熟卵母细胞 …… 此处隐藏：3390字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……