利用天然乙内酰脲酶启动子在大肠杆菌中诱导N-氨甲酰-D-氨基酸酰

将来源于放射土壤杆菌(A.radiobacter)TH572的编码N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶的基因克隆至质粒pET30a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),结果蛋白质大部分以包涵体形式表达。本试验采用天然的乙内酰脲酶启动子(PHase,长度为209bp)构建质粒pGEMT—DCB,并优化了该启动子下游的核糖体结合位点(RBS)以促进表达。

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中国医药工业杂志 C i s unl fP a cuia 0 83 () hn e o ra o h r et l2 0, 9 9 e J ma cs

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上述结果显示，1眼液高、中、低剂量组滴晶状体内S OD、CA T、GS P H. X活性、可溶性蛋白含量高于模型组，而脂质过氧化产物 M DA及

[] S r a a a a aP Krs n s my K,Re d 4 u y n ry n , ih awa d y GB. fc f Efe t o c ru n o aa ts— d c dctrco e e i i as[] uc mi n g lco ei u e aaatg n ss n rt J . n M o i i n 0, 2 3— 3 lV s o,2 03 9: 2 3 0.

不溶性蛋白含量则低于模型组，表明 1眼液可滴提高大鼠晶状体内抗氧化酶的活性，减少晶状体氧化损伤，减少不溶性蛋白的产生。 1眼液中滴剂量组的混浊度分级和生化指标测定结果与两种阳性对照药相近。3讨论

[] B bz a e 5 a i y vMA, o z E P ama e t a c m o io s h B z oC . h r c ui l o p s i c tnc t i n -cey c r sne f rt e te t e aa a t on anig N a t l ano i o h r a m ntofc t r c:

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[] e ie, 0 1 2 6: 7 -9 . J .P pt s 2 0, 2() 9 99 4 d

31亚硒酸钠性白内障的机制可能是亚硒酸钠通 . 过巯基的氧化所致¨。该模型类似于人老年性 白内障，可应用于其发生机制的研究，亦可用作

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建立抗白内障药物的动物实验模型来检测及评价药物的疗效。

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32与模型组比较， 1眼液使大鼠晶状体混浊 . 滴度发展减慢，具有延缓大鼠白内障的形成和发展的作用。高剂量组给药 1 d可见部分大鼠晶状 时 6体分级从 I级逆转为 I级，仍需进一步试验证 I I I实。

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B 92利用天然乙内酰脲酶启动子在大肠杆菌中诱导Ⅳ一甲 3 -0氨酰一氨基酸酰胺水解酶的可溶性表达 LuY[ i hm E g D一 i等 Bo e n c2 0, 1 1: 2] 0 8 4 () 1.

2 9b )建质粒p E T DCB并优化了该启动子下游的核 0 p构 G M—,

糖体结合位点 ( BS以促进表达。将所构建的质粒p E .— R ) G MT RDC转化大肠杆菌，测得产物的酶活力为0 6 3/细胞，比 B . 0 u mg p TDC质粒转化、培养所表达酶的酶活力增加 75倍。 E- B"8

将来源于放射土壤杆菌 ( . a i b ce ) H5 2 A r d o a tr T 7的编码Ⅳ一 氨甲酰一氨基酸酰胺水解酶的基因克隆至质粒p 3 a, D一 ET 0上并转化大肠杆菌 BL21 ( DE3 ),结果蛋白质大部分以包涵体形

式表达。本试验采用天然的乙内酰脲酶启动子 (。 P,长度为

[伟译胡又佳校]张

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