实验11 植物的组织培养

也许有用

第四部分 浅尝现代生物技术

也许有用

实验目的1、进行菊花的组织培养 2、尝试植物激素的应用

也许有用

一、基础知识分析 (一)组织培养的生殖方式通过必修课的学习，我们已经了解到大多 绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有 没有不用种子来培育植物的方法呢？扦插

营养繁殖 无性繁殖 组织培养

嫁接 压条

也许有用

(二)植物组织培养的基本过程

离体器官、 组织或细胞

脱分化

愈伤组织

再分化

根、芽

植物体

知识要点: 知识要点: 1.细胞分化的概念 细胞分化的概念； 1.细胞分化的概念； 2.离体植物细胞的脱分化和再分化 离体植物细胞的脱分化和再分化。 2.离体植物细胞的脱分化和再分化。

也许有用

(三)影响植物组织培养的因素 影响植物组织培养的因素有培养基配制、 影响植物组织培养的因素有培养基配制、 外植体的选取、消毒、接种、培养、移栽和 外植体的选取、消毒、接种、培养、 栽培等。 栽培等。(1)外植体选取： (1)外植体选取：不同的植物组织 外植体选取 同一植物的不同材料 (2)营养 (2)营养 (3)环境条件(pH、温度、光照) 环境条件(pH (3)环境条件(pH、温度、光照) (4)植物激素 (4)植物激素 (5)消毒 (5)消毒

也许有用

(四)生长素与细胞分裂素使用配比对实验结果的影响

使用配比 细胞分裂素>生长素浓度 细胞分裂素> 细胞分裂素= 细胞分裂素=生长素浓度 细胞分裂素< 细胞分裂素<生长素浓度

实验结果 诱导芽的生成 愈伤组织继续生长而不分化 诱导根的生成

也许有用

二、实验操作

制备MS固体 固体 制备 培养基

外植体消毒

接种

培

养

栽培

移

栽

也许有用

(一)制备MS固体培养基 制备MS固体培养基 MS

1、配制母液(1)大量元素母液(10倍液) 大量元素母液(10倍液) 倍液 分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml 分别称取10倍用量的各种大量无机盐， 依次溶解于大约800ml 10 倍用量的各种大量无机盐 800 热的(60-80℃ 蒸馏水中。 热的 ( 60-80℃ ) 蒸馏水中 。 ( 一种成分完全溶解后再加入下一 最后加水， 定容至1000ml后装入试剂瓶中 1000ml 后装入试剂瓶中， 种 ， 最后加水 ， 定容至 1000ml 后装入试剂瓶中 ， 冰箱内贮存备 用)。 (2)微量元素母液(100倍液 微量元素母液(100倍液) (2)微量元素母液(100倍液) (3)铁盐母液 100倍液 铁盐母液( 倍液) (3)铁盐母液(100倍液) (4)有机物质母液(100倍数 有机物质母液(100倍数) (4)有机物质母液(100倍数) (5)生长素母液 (5)生长素母液 (6)细胞分裂素母液 (6)细胞分裂素母液

按照MS 分别配制培养基的母液。 按照 培养基成分表, 分别配制培养基的母液。

注意:配制培养基时，一定要注意调节pH。 注意:配制培养基时，一定要注

意调节pH。 pH

也许有用

MS培养基配制方法 MS培养基配制方法

也许有用

你能说出各种营养物质的作用吗？ 你能说出各种营养物质的作用吗？同微生物 培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明 培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明 显的不同？ 显的不同？微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐； 微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐； 必需的无机盐 蔗糖提供碳源 同时能够维持细胞的渗透压 甘氨酸、 碳源， 维持细胞的渗透压； 蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维 生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径 特殊营养需求。 受到一定影响后所产生的特殊营养需求 受到一定影响后所产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主 与微生物的培养不同， 有机营养为主。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同， MS培养基则需提供大量无机营养， 培养基则需提供大量无机营养 MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物 生长必须的大量元素和微量元素两大类。 生长必须的大量元素和微量元素两大类。

也许有用

2.培养基配制与分装： 2.培养基配制与分装： 培养基配制与分装1000ml 烧杯一只， 加大量元素10 ml烧杯一只 10倍母液 (1) 取 1000ml 烧杯一只 ， 加大量元素 10 倍母液 100ml 微量元素100倍母液10ml,铁盐100 ml, 100倍母液 10ml 100倍母液 100ml , 微量元素 100 倍母液 10ml , 铁盐 100 倍母液 10ml,有机物质100倍母液10ml。此外, ml,有机物质100倍母液10ml 10ml,有机物质100 倍母液10ml。此外 ,根据培养材料 和实验目的还要附加一定量的生长素 细胞分裂素及蔗 生长素, 和实验目的还要附加一定量的生长素,细胞分裂素及蔗 1000ml, 糖 等 , 然 后 加 水 至 1000ml, 待 蔗 糖 充 分 溶 解 后 用 NaOH或 HCl调酸碱度为 pH5 调酸碱度为pH 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调酸碱度为 pH5.8, 最后加入 琼脂粉6 g,如用琼脂条 则要加8 如用琼脂条, 琼脂粉6.5g,如用琼脂条,则要加8g。 (2) 将盛有培养基的烧杯在电磁炉上， 煮至琼脂完全 将盛有培养基的烧杯在电磁炉上， 融化，补加蒸馏水至1000ml。 1000ml 融化，补加蒸馏水至1000ml。 将配制好的培养基分装到培养用三角瓶中， 将配制好的培养基分装到培养用三角瓶中 ， 每只 100ml三角瓶约装40ml培养基 ml三角瓶约装40ml培养基。 100ml三角瓶约装40ml培养基。 分装时要避免把培养基倒在瓶口上， 分装时要避免把培养基倒在瓶口上 ， 否则培养时容 易引起杂菌污染。 易引起杂菌污染。

也许有用

3、灭菌 (1)把装好的培养基的三角瓶放入高 压灭菌锅中，盖好锅盖。 压灭菌锅中，盖好锅盖。 121

℃ ( 2 ) 设置灭菌温度参数为 121℃ , 20min 开始灭菌。 min, 20min,开始灭菌。无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键. 无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键.

也许有用

(二)外植体(离体组织)消毒 外植体(离体组织)1、70﹪酒精中浸泡10min,无菌水冲洗 70﹪酒精中浸泡10min, 10min 2、5%次氯酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗 次氯酸钠溶液中浸泡， 3、用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min,无菌水冲洗 用另一5 次氯酸钠溶液浸泡5min, 4、超净台中用无菌水多次冲洗 注意：对培养材料进行表面灭菌时， 注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药 剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。 剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。 不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。 不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。

也许有用

(三)切段后接种1、先用肥皂洗手，穿 先用肥皂洗手， 上工作服，戴上口罩和工 上工作服， 作帽。 作帽。 2 、 放 入 培养 瓶 和灭 菌后的接种用具( 镊子、 菌后的接种用具 ( 镊子 、 解剖刀、 接种针) 解剖刀 、 接种针 ) , 把镊 子、解剖刀、接种针插入 解剖刀、 70% 内 盛 70% 酒 精 的 广 口 瓶 中。

也许有用

在酒精灯火焰旁， 3 、 在酒精灯火焰旁 ， 打 开三角瓶， 开三角瓶 ， 把花茎用无菌解 剖刀切成几段， 剖刀切成几段 ， 每段至少有 一张叶片 4 、 切段插入培养基 ， 诱 导愈伤组织，盖上封口膜。 导愈伤组织，盖上封口膜。 5 、 愈伤组织插入生芽培 养基，盖上封口膜。 养基，盖上封口膜。 6 、 …… 此处隐藏：2417字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……