药物分析13第十三章 生化药物分析

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第13章 生物药物分析概论

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本章主要内容

生物药物种类 与特点

生物药物质量 检验的基本程 序与方法

生物药物理化 测定法：HPLC 法、酶法、电 泳法

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一、概述

生化药物

生物制品 (生物技术药物)

生物药物( biopharmaceu ticals):利用 生物体、生物 组织和器官制 得的天然活性 物质及其类似 物

分类没有严 格的界限药物分析中国药科大学药物分Monday, August 19, 2013 3

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生化药物biochemical drugs动植物及微生物提取、分离的天然生物活 性物质及半合成得到生命基本物质及其衍 生物等人纤维蛋白原氨基酸、Pr类 凝血酶、胰蛋白酶 酶、辅酶类 肝素、玻璃酸 多糖类

脂类

核酸类

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生物制品biological products应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工 程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各 种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 菌苗、疫苗、类毒素

免疫血清

其他(血液制品、组织制品等)自动免疫制品

诊断制品药物分析中国药科大学药物分Monday, August 19, 2013 5

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基因工程药物 biotechnology drugs

利用重组DNA等生物技术生产的药物

分离纯化

受体细胞表达该Pr将该基因导入受体细胞

分离或合成控制该Pr合成的基因发现并确定有治疗作用的Pr药物分析中国药科大学药物分Monday, August 19, 2013 6

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重组胰岛素原的合成胰岛素原胰岛素原基因

mRNA反转录酶 (A)n 胰脏 胰岛素原 mRNA

与质 粒连 接

cDNA

感染 E.col i 重组质粒

转化细菌

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基因工程药物主要类别蛋白质多肽类： 细胞因子类人生长激素释放抑制因子 激素类及神经递质类 (Human Somatotin) 干扰素(Human Interferons)

酶及凝血因子类核酸类： 反义寡核苷酸 等

链激酶(Streptokinase)

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5. 生化药物和基因工程药物特点

1)共同特点：活性强，毒副作用小 2)分子量大，结构确证难 3)全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、 中间体、产品

4)生物活性检查5)安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、 外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等

6)效价(含量)测定

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二、检验的程序和方法

收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》

鉴别

杂质 检查

安全性 检查

含量(效价) 测定

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1.鉴别1)理化鉴别法：UV、肽图等

反应序列信息

RP-HPLC法分析重 组人胰

高血糖素类 多肽-1(7-36) 肽图谱 《药物分析杂志》 2005,25(1)24-26 rhGLP-1(7-36)由30 个氨基酸组成，结 构中含2Lys、1Arg、 1Asp、3GluMonday, August 19, 2013

标准品

样 品

胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解11

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专属性强，应用广泛2)生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等Marker 116.0k 66.2k 45.0k 35.0k 25.0k 18.4k 14.4k Sample

免疫双扩散法3)生物鉴别法：动物试验等

SDS-PAGE药物分析中国药科大学药物分Monday, August 19, 2013 12

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2. 杂质检查1)一般杂质：氯化物、重金属、水分等 2)特殊杂质：有关物质等

高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter ,HPGFC)、RP-HPLCCH2 H2C HO OH O CH2 HCOH CH2 O OH O H2C O O HO OH O HO CH2 OH O CH2 O O O HO O H2C OH O O HO H2C HO O O O CH2 HCOH CH2 O O CH2 HO O O O HO CH2 OH O CH2 HCOH CH2 O OH O CH2 O

O

O

HO

O

CH3

OH

O

O

O CH2 HCOH CH2 OH O HO H2C O

HO

OH O CH2 OH HCOH CH2 O O OH O CH2

CH2 HO OH

O O

HO

O HO

CH2 OH

O O

O CH2 HCOH

O O CH2 HCOH CH2 O O HO OH O CH2

CH2 HO OH

O CH2 HCOH CH2 O OH O CH2

O O

HO

O HO

CH2 OH

O

H2C OH

O

O CH2 HCOH CH2 HO O HO O O H2C

O

H2C

O

萄聚糖凝胶 立体网状结构图O

O

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标准蛋白色谱图1 24 5 3

6

0

4

8

12 时间(min)

1.右旋糖酐蓝 2.醛缩酶 3.血清白蛋白 4.碳酸酐酶 5.抑蛋白 酶肽 6.酪氨酸药物分析中国药科大学药物分Monday, August 19, 2013 14

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重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体 (rhTRAIL)质控方法和质量标准的研究 《药物分析杂志》2005,25(3)253-257

Synmetry 300 C18柱(3.9×150mm)

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3. 安全性检查1)热原检查 2)降压物质检查 家兔法、鲎试剂法

3)过敏试验4)异常毒性试验 5)无菌试验 6)宿主细胞蛋白残留、DNA残留 ELISA法 豚鼠、大鼠存活试验

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