生物化学综合实验报告(3)

0.37

0.4 0

0.4 5

0.5 2

0.60

0.6 6

0.7 6

0.8 7

分析与讨论：

1.小白菜DNA提取实验的过程中，我们组提取的蛋白沉淀明显偏少这说明我们对白菜的研磨程度不够，应该把小白菜研磨的更加细。在这一组实验的过程中我们组在重复去除细胞碎片，变性蛋白质，氯仿等残物时取得上清液不多造成DNA的遗失。所以以后在用玻璃棒

缠纤维沉淀时，无法缠绕上。我们组采取了离心的方式将其沉淀在离心管的底部。然后按照实验步骤去除残余RNA物质。我们组所测得的DNA吸光度比值为1.747，比较接近标准的1.8。我们的提纯步骤还是比较成功的。就是所得样品有点少。

2.在做猪肝脏的提取过程中，肝脏的研磨程度可能不够精细，而且肝脏组织比较难研磨，而且还是冷冻的肝脏，所以我认为这一点可能有影响。在肝脏重复洗涤的过程中我们采取了离心的方式来洗涤肝脏沉淀，所以我认为这个可以更好地去除上清液的杂质。在分离核糖和蛋白质的过程中，我们的溶液也并不粘稠。后来我们在进行抽取上相水层，去除中层变性蛋白。该过程中我们除杂不够完善，操作不够精细，导致少量中层变性蛋白混入DNA。本次实验吸取了上次实验教训，我们的产物量很多。但是除杂不够完全。在进行吸光度测试时，我们稀释了30倍，但是我们的吸光度依旧偏高，因为杂质的影响，所以吸光度比值不太接近1.8。

3.我们组在弄DNA标准曲线时，操作还是满规范的，我们最后所得拟合趋势线的R平方达到了0.999的精度。然而我们在做样品的测定时，由于小白菜DNA样品较少且全为未稀释样品，所以我们只取了0.02ml的样品稀释十倍，在坐这个实验时进行沸水浴的过程时间超过了15min.可能过度的时间会对实验结果造成影响。我们在算出的产率中可以看到，第一个实验中的DNA产率有点偏低，所以第一个实验虽然纯度高但是产率低，在第二个试验中，得到的DNA虽然产率相对于其他组较多但是纯度就没有第一组的高。本组实验比较成功。

4.DNA的琼脂糖凝胶电泳实验，这个实验我们犯了错误，这个实验是两个小组共用一块胶板的，我们凝胶板的制作的过程还是可以的，但是我们在加样品之前忘记了对样品加入6X电

泳缓冲液。完全照搬实验材料上的步骤，导致了第一次失误，然后进 行第二次实验，在这次实验过程中因为，个人操作原因（手抖），加样品时将琼脂糖凝胶刺穿了，加样品失败。（上图中从下向上，第三个胶槽）可以发现该DNA染料只跑了三分之一不到。然后再第一个胶槽重新加样。我们组的实验所用胶槽是从下向上的三个。感觉跑的还可以。主要还是要加样时注意不能破损凝胶。另一组的实验可能也是因为加样品的问题，导致少了一条带。

实验心得：

本次实验化学综合实验，锻炼了我们独立处理问题的能力，在以前的实验课中我们的化学试剂都是配好的，我们直接拿过来就用，在这次的综合实验中，很多试剂都得自己配，这锻炼了我们独立解决问题的能力。而且在本次实验给的指导书中有很多的所需溶液是要根据试验情况进行自我计算的。并不像以前的试验中直接对着实验报告加试剂。而且本次实验过程中老师给予的知道是很少的。这个实验的过程中很多的细节都得自己想方法处理。 本次生物化学综合实验也让我们明白组与组的合作的，很多的数据都是个人进行计算，然后几个一起综合讨论得出一致的结果。这个大大提升了我们的办事效率，加强了同学之间的合作交流。同时，更好地让我们组员之间合作，不浪费时间，在保证准确性的条件下，合理分配时间。我们在第二天做实验时，我们发现第四个实验与第三个实验并无冲突的条件下，先做第四个实验，然后再利用第四个实验电泳的等待时间，来完成第三个实验，节约了时间。

不仅如此，本次实验时间是所有实验中最长的，整天都在实验室中，锻炼了我们的耐性。也让我们明白做科学研究，要耐得住性子，要坚持。同时，也暴露出实验过程中的冒失，

例如在第四个实验室待测样品忘加入6X电泳缓冲液，我们太过于依赖实验指导材料，未联系以前所做的类似实验的步骤。在加入样品的时候有点急躁导致凝胶被刺穿。这都反应了我们还要继续做实验，积累经验。另外我们在实验的过程中要如实记录数据，遵循客观事实。不可以为了节省时间，就去“借鉴”别人的数据，这是不诚实的行为。同时，这个并不能锻炼我们的个人能力。不能懒惰不做实验，对待事情时要有积极的态度。总之做实验这个过程让我学到了很多，也能够更加自主的去完成实验。

参考文献：

[1] 易庆平,罗正荣,张青林.植物总基因组DNA提取纯化方法综述[J]安徽农业科学2007 (25)

[2] 韩玉杰,贾炜珑,王自霞,周小梅.几种提取植物DNA方法的比较[J]山西农业科学2008 (07)

[3] 张宁,王凤山.DNA提取方法进展[J]中国海洋药物. 2004(02)

[4] 李军,郭晏海,党琳.几种药用植物DNA提取与纯化方法的比较[J]陕西中医学院学报. 2002(05)

[5] 邱芳,伏健民,王斌.从植物细胞核分离大分子量核DNA[J]植物学报1999(11)

[6] 鲍毅新,孙波,张龙龙,赵庆洋.对动物组织DNA提取方法的改进及PCR检测[J]浙江师范大学学报(自然科学版)2009(03)

[7] 邵碧英,杨婕,张体银.动物产品的DNA提取方法[J]畜牧与兽医2005(09)

[8] 汪薇,王诗航.光密度值测定在实验医学研究中的应用及意义[J]解剖科学进展2006(03)

[9] 康熙雄,耿会娟,王雅杰.电泳技术的临床应用[J]中华检验医学杂志2007(11)

[10]方宣钧,孔巍,金芜军.快速一步法(ROSE法)提取DNA应用于RAPD-PCR扩增[J]高技术通讯1997(10)