酸性微环境对单核巨噬细胞分泌血管内皮细胞

酸性微环境对单核巨噬细胞分泌血管内皮细胞

·364·

华西口腔医学杂志第28卷第4期2010年8月

WestChinaJournalofStomatologyVol．28No.4Aug.2010http：//

[文章编号]1000－1182（2010）04－0364-03

酸性微环境对单核/巨噬细胞分泌血管内皮细胞生长因子及Tca8113细胞杀伤作用的影响

宋宇峰冯红超唐路彭江帆马洪

（贵阳医学院口腔医学系，贵州贵阳550004）

[摘要]

目的

通过酸性微环境下单核/巨噬细胞分泌血管内皮细胞生长因子（VEGF）及对舌癌细胞株Tca8113杀伤

从健康人的外周血中分离

作用的研究，探讨肿瘤内浸润的单核/巨噬细胞在酸性微环境影响下的功能状态。方法

单核细胞并通过培养将其转化为单核/巨噬细胞，分别调整培养液的pH值为酸性：6.6、6.8；常规环境：pH值为7.2，将单核/巨噬细胞和舌癌细胞株Tca8113进行混合培养，MTT法检测单核/巨噬细胞对舌癌细胞的杀伤作用；采用ELISA法检测不同微环境下单核/巨噬细胞VEGF的分泌情况。结果

在酸性微环境下，单核/巨噬细胞对舌癌细

可能正是肿瘤

）；而分泌VEGF的能力较常规环境下增强（P<0.05）。结论胞株的杀伤作用低于常规环境下（P<0.05调节单核/巨噬细胞在肿瘤组织中的功能还需进一步的研究。

组织局部的酸性微环境改变了单核/巨噬细胞的功能，更多的参与了肿瘤的生长，但其在肿瘤中的具体机制及如何

[关键词]单核/巨噬细胞；舌鳞状细胞癌；酸性；血管内皮细胞生长因子

R739.86

[中图分类号][文献标志码]A[doi]10.3969/j.issn.1000-1182.2010.04.006

Experimentalstudyontheanti-tumoreffectofmonocytes/macrophagesagainstTca8113cellsandthese－cretionofvascularendothelialgrowthfactorinacidmicroenvironment[Abstract]

Objective

SONGYu-feng,FENGHong-chao,

）TANGLu,PENGJiang-fan,MAHong.（Dept.ofStomatology,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,China

Toinvestigatetheanti-tumoreffectofmonocytes/macrophagesagainstTca8113cellsand

Peripheral

thesecretionofvascularendothelialgrowthfactor（VEGF）inacidmicroenvironmentinvitro.Methods

bloodmononuclearcellswereextractedfromhealthyperson′sbloodandcultivatedtotransformintomonocytes/（pH6.6andpH6.8）macrophages.Themonocytes/macrophageswereculturedwithTca8113inacidmicroenvironment

andinnormalmicroenvironment（pH7.2）.Theanti-tumoreffectofmonocytes/macrophagesagainstTca8113cellswere（ELISA）.ResultsexaminedbyMTTassay.TheexpressionofVEGFwasdetectedbyenzyme-linkimmunoassay

The

anti-tumoreffectofmonocytes/macrophagesagainstTca8113cellsinacidenvironmentwaslowerthaninnormalenvironment（P<0.05）.VEGFexcretedbymononuclear/macrophagewassignificantlyhigherinacidmicroenvironmentthaninnormalmicroenvironment.Conclusion

Duetoacidmicroenvironmentinsidetumor,theanti-tumoreffectof

monocytes/macrophagesagainsttumorcellwasdecreased,butthesecretionofVEGFwasgraduallyincreased.However,thefunctionofmonocytes/macrophagesonanti-tumorneedmoreresearch.

[Keywords]monocytes/mcrophages；tonguesquamouscellcarcinoma；acid；vascularendothelialgrowthfactor

研究表明口腔鳞癌组织内有大量的单核/巨噬细胞浸润，其中部分细胞参与了肿瘤的生长和转移。

实体肿瘤多由于缺氧等因素造成局部酸性的微环境，而单核/巨噬细胞不同的功能状态与所处的局部微环境有关，因此本课题组通过细胞培养的方法进

[收稿日期]2009-04-25；[修回日期]2009-10-20

[基金项目]国家自然科学基金资助项目（30660200）；贵州省优秀科技教育人才省长专项基金资助项目（[2005）160号][作者简介]宋宇峰（1962—），男，贵州人，教授，博士[通讯作者]冯红超，Tel：0851-6773504

行酸性微环境下单核/巨噬细胞对Tca8113人舌鳞癌细胞株杀伤作用和分泌血管内皮细胞生长因子（vas-）的研究，以cularendothelialgrowthfactor，VEGF

探讨肿瘤内浸润的单核/巨噬细胞在局部微环境影响下的功能状态。1材料和方法1.1

材料

MTT试剂盒（Sigma公司，美国），双抗、淋巴细胞分离液、单核细胞分离液（天津市灏阳生物制品

酸性微环境对单核巨噬细胞分泌血管内皮细胞

华西口腔医学杂志第28卷第4期2010年8月

WestChinaJournalofStomatologyVol．28No.4Aug.2010http：//

·365·

科技有限责任公司），抗CD68单克隆抗体、无钙镁PBS液（武汉博士德生物工程有限公司），RPMI-1640培养液（Gibco公司，美国），胎牛血清（杭州四

季青生物工程材料有限公司）。Tca8113人舌鳞癌细胞株购自上海中国科学院细胞库。

1.2方法

1.2.1单核/巨噬细胞的获取及鉴定取健康人新鲜外周抗凝血20mL，采用密度梯度离心法，分离单个核细胞，通过2次贴壁法，使单个核细胞贴壁，加入RPMI-1640（含10%胎牛血清、1%双抗）在37℃，5%CO2培养箱中继续培养，每隔3d换液，到第7天时采用机械法收获贴壁的单核/巨噬细胞。

单核/巨噬细胞的鉴定：采用流式细胞仪，用抗CD68单克隆抗体分析悬液中的细胞，单核/巨噬细胞定义为CD68阳性细胞，结果CD68阳性细胞占94.03%，满足实验需要。悬液涂片后，以瑞氏染色计数单核/巨噬细胞数目，胎盘蓝染色计数死细胞，中性红计数活细胞，结果细胞活性大于96%。1.2.2MTT法检测单核/巨噬细胞的体外杀瘤活性A组：用25%Hepes和7.5%NaHCO3调整RPMI-1640培养液pH值为7.2，按1∶5效靶比分别把效应细胞（单核/巨噬细胞，每毫升0.2×106个）和对数生长期靶细胞（Tca8113细胞，每毫升1×106个）加入96孔板，每孔各加入100μL。另设单独的效应细胞和靶细胞组，每组设5个平行孔。4h后，每孔滴加MTT（5mg·mL-1）10μL，继续培养4h，离心弃上清，每孔加二甲基亚砜100μL，振荡溶解15min后，用酶标仪570nm测光密度值（A），按下面公式计算单核/巨噬细胞的杀瘤活性。杀伤活性（%）=[1-（实验组A值-单独效应细胞A值）÷单独靶细胞A值]×100%。B组：用pH值6.8的RPMI-1640培养液进行上述培养及检测。C组：用pH值6.6的RPMI-1640培养液进行上述培养及检测。

1.2.3ELISA法进行培养液中VEGF的测定pH7.2组：将Tca8113培养上清液（每孔0.3mL）、单核/巨噬细胞（每孔0.3mL，每毫升0.2×106个）加入12孔板中，调整RPMI-1640培养液pH值为7.2，分别在3、5、7h后收集培养上清液，采用人VEGFELISA试剂盒进行检测，操作步骤严格按照说明书进行，每组设5个复孔。

pH6.8组：调整RPMI-1640培养液pH值为6.8进行上述培养及检测。pH6.6组：调整RPMI-1640培养液pH值为6.6进行上述培养及检测。1.3统计学处理

应用SPSS10.0软件，采用配对t检验，P＜0.05具有统计学意义。

2结果

2.1

酸性微环境下单核/巨噬细胞对人舌癌细胞系Tca8113的杀伤活性的影响

倒置显微镜下观察，在混合培养中可见到单核/巨噬细胞围绕Tca8113细胞，并可见癌细胞被单核/巨噬细胞所吞噬及裂解（图1）。图2为不同pH值进行混合培养下的单核/巨噬细胞对Tca8113细 …… 此处隐藏：3670字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……