CYP2C19基因多态性及其研究进展(2)

来源：网络收集时间：2026-08-15

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成了用同一种限制性内切酶切割不同物种DNA序列时，产生不同长度大小、不同数量的限制性酶切片段。后将这些片段电泳、转膜、变性，与标记过的探针进行杂交，洗膜，即可分析其多态性结果。

付良青等[17]就应用限制性片段长度多态性分析法( PCR-RFLP) ，对74 名汉族健康志愿者和6 名蒙族健康志愿者进行基因多态性分析。

2 PCR-荧光探针法

PCR-荧光探针法（FQ-PCR）是一种新的基因定量检测技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针，巧妙地把核酸扩增（PCR）、杂交及光谱技术结合在一起，从而实现了对目的基因的准确定量检测，正发展成为临床实验诊断的常规技术。

北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司生产的CYP2C19基因多态性检测试剂盒（PCR-荧光探针法），采用荧光PCR法结合ARMS技术，设计多对引物直接判读基因的多态性位点突变，结合特异性的荧光探针，解决了非特异性的问题，而且试剂可采用常规定量PCR仪器即可，简单快速。

3 多重PCR点突变筛查技术

高云等[18]针对等位基因CYP2C19*1、CYP2C19*2、CYP2C19*3设计不同的DMP引物，建立了一个多达6重的PCR点突变筛查技术，用于CYP2C19两种最有影响力的突变的同时检测。他们设计了含有拱桥式次黄嘌呤的多重PCR引物(deoxyinosine multiplex-PCR primer，DMP)，在一个PCR管内，同时检测CYP2C19的*1、*2、*3等位基因。成功检出248份健康人抗凝静脉血CYP2C19等位基因*l、*2、*3。

4 基因芯片

基因芯片(gene chip)（又称DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。

上海百傲科技有限公司生产的CYP2C19基因检测试剂盒(DNA微阵列芯片法)采

用从人外周血细胞中提取基因组DNA的方法，用CYP2C19基因特异引物对1和引物对2经过PCR扩增后，将带生物素标记的扩增产物与固定在醛基基片上的CYP2C19基因型检测探针进行特异杂交反应，并通过酶促显色反应，使特异性杂交信号呈现出颜色；通过对芯片进行扫描得到样品DNA扩增产物与每个基因位点的野生型和突变型探针杂交形成的杂交图像；经过软件分析该图像，判断待检样品的基因型。

邢军芬等[19]采用碱性磷酸酶促显色原理设计制备固定有*2、*3检测探针的 CYP2C19基因芯片，通过EDTA抗凝外周血样本提取基因组DNA，PCR扩增 CYP2C19*2、*3突变片段并与芯片在43℃杂交，经洗涤、显色后扫描获取图像，经软件分析输出基因型并对基因芯片性能进行系统评价。结果: CYP2C19 显色型基因芯片检出限为20ng基因组DNA；与基因组DNA同等浓度鱼精DNA检测信号阴性；用 *2/*2、*1/*3 基因型样本重复检测10次，结果一致；常见浓度的甘油三酯、总胆固醇、胆红素和完全溶血对测定没有影响。临床三家医院临检实验室对1000例临床样本的检测与双向测序方法比对验证，结果一致。

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