2011年高考试题 - 生物（江苏卷）解析版 - 图文(8)

①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为 ▲ 。 ②在第 ▲ 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。

①第1组： ▲ ； ②第2组： ▲ 。 (3) PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的 功能，这是因为 ▲ 。

(4)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb 即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。

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【解析】：本人感觉这题很那个??2011版考试说明明确删除了PCR这一考点，但整个考题从头到尾都是考查PCR的，不知道高考命题组是否学习了考试说明？

①下图为人教版教材中的插图，查图可知，第二轮中含引物II（或考题中的引物A）比例为3/4，第三轮中占7/8，即所有DNA片段中，只有一个片段不含引物II，故推测在第四轮中，含引物II（或引物A）的比例为15/16。

②由于题图中的引物A和引物B均不在该片段的端点，因此第一轮循环后，得到的两DNA片段中两条脱氧核苷酸链都不等长，通过自行绘图可推知，第二轮中亦不会出现等长的，需到第三轮（试试看吧，这就不画出了）。

(2)这一问，对考

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生而言，完全不知从何说起，因为没有哪个版本的高中生物教材有关于引物选择方面的介绍，唯高校网络资源中有不多的介绍：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

1、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

2、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

3、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

4、避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

5、引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

6、引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

如果能了解上述信息，或许可以分析题图中的碱基组成，查出如下不合理之处： ①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效

②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效

(3) 据人教版教材相关介绍，DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上（但这一内容苏教版并非有只言片语）。

(4)据两种酶单独和联合切割的结果分析，EcoRV在质粒上有一个切点，Mbol在该质粒上有两个切点，以上三个切点不存在重叠现象，故可标注如下图：

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