抗氧化剂抗氧化活性的测定方法(二)

抗氧化剂抗氧化活性的测定方法(‘二)王会，郭立2谢文磊‘1河南工业大学化学化工学院， (郑州，502 2河南省粮油机械工程有限公司， 405 ) (郑州，503 400 )摘要关健词

综述了杭氧化剂抑制脂质氧化、清除自由基、抑制自由基对底物的氧化降解以及还原能力 4类测定抗抗氧化剂 .抗氧化活性，测定方法

氧化活性的方法，并讨论了评价或表征测定结果的方法和参数以及对测定方法的要求。

33以抗氧化剂抑制自由基对底物的氧化降解为基 .础的方法

此法与 3 ..方法不同之处在于测试体系中 132 .既有底物又有自由基，但底物自身不能生成自由基，它与外源自由基反应，形成有荧光或带颜色的特征物质，抗氧化剂的加人使生成的特征产物减少，由此可测得抗氧化活性。3 3 1 AC法 . . OR

全。在 O A R C法中， A H与抗氧化剂的摩尔比非 AP常高(超过 2 0 )使得此法专一性强， 00,测量的是抗氧化剂直接清除自由基的能力，由于使用荧光技术，此法也能测量含有抗氧化剂的稀释的油乳状液。此法测得的是总的抗氧化活性，而且可自动化、标准化，但需要全自动系列化分析仪。该法最初用于测定生物体系中的抗氧化剂，后来广泛用于天然酚类物质和食品(如茶叶、蔬菜、水果和草药提取物)的测定。3 3 2 AP法 . . TR

O A (xgn c as b c c cy氧 ye r il r ne at,自 R Co a a b a a i d o p由基吸收能力)法是近年来由Co a等人[〕 Ga[在 l- 3 1 z e3研究的基础上发展起来的， r2[ 1原理如下：天然蛋白

W e等人的 T A ( t r il p g anr y R P a a c tpi a- t l a r n n o d a tx at m t, i i npr er o d a e总自由基清除抗氧化能力) 3 a法[] 5是过去 1年中测量血浆或血清总抗氧化能力最广的 0方法。该法中的过氧自由基由 A P A H产生，向血在浆中添加完 A P A H后，通过测量反应过程中消耗的氧检测底物的氧化状况。在诱导期内，氧化被血浆中的抗氧化剂抑制。结果以血浆的诱导期与标准抗氧

质R -藻红蛋白 ( hc rhnR E在50 (py e ti - ) 4 n 3 o y r, - P m光波激发下可发射 55m的荧光。在有自由基或氧化剂 6n

时，P P E的荧光逐渐减弱； -当有抗氧化剂存在时

, P -P E的荧光减弱被抑制。自由基或氧化剂可用 A P AH

(产生过氧自由基)H0-U主要产生 H"和、 22 2 C+ ( O )C 2 u+。使用 A P A H时，可测量所有公认的抗氧化剂，

化剂 To x的诱导期的比值表示。而 G il等人 ro l h ei sl

如抗坏血酸、生育酚、胡萝卜使 u -2。一 p一素。用C2 Hq+时，可测量甘露醇、葡萄糖、尿酸以及过渡金属赘合剂

报道的 T A R P法〔] 3基本上是 Ga r 3的复制。 4 le法〔] z 2Gae于 19 l r 90年发表的 T A z R P法用 A P A H产生过

这类物质，不用于测定抗坏血酸、生育酚[]。一[。测定 3 3结果以 To x标准抗氧化剂) rl o当量表示。此法是一种新的、 独特的评价各种物质抗氧化活

氧自由基或用 Ce一 u+抗坏血酸产生H -氧化底物 B O, -或 RP藻红蛋白) Ga r -E o z假定在过氧自由基或 le H O存在时，E荧光的减弱与时间呈线性关系。由 P试样保护 P E防止过氧自由基或 H氧化的诱导期 O与 To x rl诱导期的比值定量给出试样的抗氧化能 o力。然而，E荧光淬灭的速度与过氧自由基或 H P O

性的方法。该法优于其他类似方法〔,〕 33的原因有2 24个：1使用了曲线下面积( UC的方法， () A )将抗氧化剂对自由基作用的抑制时间和抑制程度结合成一个单独的量。其他类似的方法是在固定抑制率时使用抑制时间或在固定的时间内使用抑制率作为定量分析的基础。() 2此法使用不同的自由基生成剂或氧化剂，这点很重要，因为抗氧化活性与分析中使用的自由基或氧化剂有关，而且 P E和自由基间的反应完第一作者： 硕士研究生(谢文磊为通讯作者)。,此篇文章续本刊 2 0,23:2 6 0 63 ( )9一9收稿 日期：0 5 2 0 20 -1 - 5

不是线性关系，而且诱导期一般很难测定[] 30 6G il等人的T A hei sl R P法[〕 R C法使用同 3和O A 4样的测试体系，不同之处在于动力学曲线以及由动力

学曲线计算出的抗氧化活性。T A R P法[] E荧 3中P 4光的减弱与时间呈线性关系(以恒定的速率减弱)直，

到荣光减弱8%; R L[〕 0而O A法[中荧光强度的减小 3 7随时间减慢(不以恒定的速率进行)。造成这个差异最可能的原因是 P E的起始浓度不同。T A R P法的

2 0 V

l 2 . T t l ) 06 . N 4 o a 2 0 o3 o ( 2

抗氧化活性可用图表法、诱导期计算； O A在 R C法中，抗氧化能力用动力学曲线下的面积计算。二者都以 To x当量的形式来表示。 rl o3 3 3 F D法 . . DC H- A

p萝卜漂白 pate hg是 法(conbai t )一胡素 -re l n e e c s t根据乳状液中的亚油酸能自动氧化，生成的自由基与

民胡萝卜素反应，引起p一卜胡萝素的黄色衰减( 7在40 n m处吸光度减小)在有抗氧化剂存在时，胡萝卜；日一素漂白的速率被减缓表 2产生 C L的方法自由基源AAP HABAP

V l nn和 us报道的 D F -A d hrf - K ui a oe k C H D (i ool c u

o sn ie n, r c-a t e二氧荧光素二乙酸醋) e id c a法也是测定

总的自由基清除能力[1 A P 3o H产生的过氧自由基 8 A

活性自由基

发光剂lmio u nll mio u nl

参考文献4U n

氧 CHD,化D F -A生成D F hrlrcn二氯 C ( ofosi d louee, i c荧光黄) C。D F有很强的荧光 ( x8 n F 56 E 40 m 2 m, n, 54 m)在 0 n m也有吸收，因此可用荧光法或分光光度法检测。

过氧自由基过氧自由基

4.. 1

E T/o十 ) 0 D A C ( 2/ 2 2 H叶黄素一 pxnn- h oate y i氧化酸黄嗦岭/黄嚓吟氧化酶

4,‘

lmio u nl

4 44

内J

l gn u ei d n

在此法中， C D F的荧光的形成或吸光度的出现

包括4个阶段：第一延滞期( e t pa ) t fsl hs是由 h i a r g e于样品中的抗氧化剂形成的，它们被过氧自由基消耗

完后反应进行到第一传播阶段( e t a tn t fsp p ao h i r gi r opa )由于在第一传播阶段添加的内标抗氧化剂 hs; e To x中断此传播阶段， ro l致使第二延滞期开始，相应的反应随 T o x的消耗进人第二传播阶段。由第一 rl o延滞期与第二延滞期的比值可得出样品的抗氧化能力。 334化学发光法 ..化学发光(hm l i c c,法的基本原理 ce im ns neC ) u ee L是活性自由基氧化发光剂(常用的发光剂有 l i l u n m o

该法给出的抗氧化活性是通过

抑制率来表示的， 且测试体系是在非控制条件下进行的(动氧化)不自，能得到重复的数据，因此很少用于定量测定。如果将自动氧化改成可以控制的反应 (如使用自由基引发剂)此法就可修改成一个能定量和具有重现性的方，

法。一卜 R胡萝素漂白法使用的是乳化的脂质，而在乳化的脂质乳状液中影响被测物抗氧化活性的因素增

加，很难得到重复性的结果。如果不考虑这一点， R -胡萝卡素漂白法是很有价值的，特别是对于研究脂溶性抗氧化剂。但是，此法不适合测定水溶性的化合物。

336藏花素漂白法 ..

(鲁米诺)l i n、 c ei u g n光泽精)形成的发光剂自由等，基能发光，发出的光可由发光计检测，容易记录。抗氧化剂是活性自由基清除剂，它能抑制 C, L使发光强

藏花素漂白法(r i ba i tt最初是由 c c lc n e ) on h g e s Br等人〔〕 o s 4提出、ua等人[〕 6 T br o 4加以改进， 7用于测定复杂混合物和食品的抗氧化能力。藏花素是一种 …… 此处隐藏：15175字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……