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荧光免疫层析技术的原理与进展

荧光免疫层析技术的基本原理层析法(chromatography)的原理是利用混 合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、 分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、 分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase) 和流动(Mobile Phase)相组成。

固定相是固体物质或固定于固体物质上的 成分。 流动相是可以流动的物质，如水或各种溶 剂。 层析过程：当待分离混合物随流动相通过 固定相时，由于混合物各组分的理化性质 的差异，与固定相相互作用弱的组分随流 动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的 速度快；与固定相相互作用强的组分向前 移动的速度慢。从而实现混合物中各组分 的分离。

免疫层析法

免疫层析技术是建立在层析技术和抗 原一抗体特异性免疫反应基础上的一 项新兴免疫检测技术。

免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤 维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛 细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应。

待 测 物

层析方向T

免疫反应

C

免疫层析技术基本原理示意图

荧光(fluorescence)

荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃 迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式 释放出能量，称为荧光。 发射光谱和激发光谱

发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下 记录的样品发射荧光的强度。 激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波 长的激发光激发样品记录的相应的荧光发射 强度。

荧光效率定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率 计算公式: 荧光效率=发射荧光的光量子数( 荧光强度) 吸收光的光量子数(激 发光强度)

荧光寿命 定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程

度时所用的时间。 各种荧光物质的荧光寿命不同。

荧光淬灭

定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发 射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。 引起荧光淬灭的因素：有如紫外线照射、 高温、某些硝基化合物、重氮化合物等。

免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤 维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛 细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应。待 测 物 层析方向T C

免疫反应

免疫层析技术基本原理示意图

常用荧光免疫层析法

夹心法

竞争法

双抗原夹心法

双抗体夹心法

竞争法

待测物中的某种抗原与T(检测线)线处同 种抗原竞争性地与标记抗体相结

合的过程。

竞争法结合垫

免疫层析法检测的实物 图

Y1:A的单抗与标记物的偶联体 Y2:抗原A Y3:羊抗鼠二抗 含抗原 A

夹心法 待测物中某种抗体(抗原)与T线处抗原A (抗原A)以及荧光标记的抗原(抗体)特 异性相结合的过程，在T线处形成抗体A+抗 原+抗体B形式的夹心结构。结合垫

免疫层析法检测的实物 图

双抗体夹心法待测液含抗原Ag (k)Ab1-Ag (k)Ab1-Ag-Ab2 Ab3-(k)Ab1 阳性结果T,C均有颜 色

(k)Ab1

Ab2

T待测液，不含抗原Ag (k)Ab1 (k)Ab1

CAb3-(k)Ab1 阴性结果T无颜色，C 有颜色

(k)Ab1

Ab2

T双抗体加心法检测原理图

CK代表某一标记物

结合垫

免疫层析法检测的实物 图

双抗原夹心法

双抗原夹心反应模式阳性检测(左)与阴性检测(右)

利用荧光免疫层析试纸条可以实现对待测 物的定性或者定量检测.