应用玉米秸秆生产淡紫拟青霉36-1 菌株孢子

应用玉米秸秆生产淡紫拟青霉36-1 菌株孢子

（(）!&&&9+&(%中国生物防治H[B@NSNL?JU@FP?WcB?P?.BYFPH?@QU?P!""#年%%月

应用玉米秸秆生产淡紫拟青霉!"#$菌株孢子

黄永兵，肖炎农!，黄蓉，成儒萍，江丽娜

（湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室，华中农业大学植物科技学院，武汉

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摘要：为降低淡紫拟青霉&*$%菌株生产成本，以玉米秸秆和玉米粉不同配比筛选，并通过添加氮源、碳源等单因子试验及玉米秸秆、玉米粉、米糠、硫酸铵等(个因子&水平正交试验。筛选出淡紫拟青霉&*$%菌株固体发酵最佳产孢配方为：玉米秸秆,米糠,玉米粉-*,(,%’（质量比），硫酸铵含量为%./0.，含水量’"1，其发酵产物产孢量为#2##3%")个/.（干重）。发酵产物在室温下贮藏!4%%个月，孢子萌发率仍达)"1左右。关

键

词：淡紫拟青霉；玉米秸秆；固体发酵；生物防治

文章编号：%""’$)!*%（!""#）"($"&&9$"’

中图分类号：5(&!2(’"2(#*；67)!"2*文献标识码：8

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［%］

淡紫拟青霉［!"#$%&’()$#*&%&"$%+,*（6[?_‘）5F_S?@］是植物线虫病害重要的生防真菌。

［!］

淡紫拟青霉&*$%菌株是本研究室自行分离出来的高效生防菌株，除有效防治植物根结线虫［&］［(，’］和胞囊线虫外，对多种真菌病害也有很好的防治效果。如何实现低成本、高效益的规模

收稿日期：!""#$"%$%&

基金项目：华中农业大学科研项目基金资助（’!!"($"’""’）作者简介：黄永兵（%)#*+），男，博士生；!通讯作者，博导。

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应用玉米秸秆生产淡紫拟青霉36-1 菌株孢子

第1期黄永兵等：应用玉米秸秆生产淡紫拟青霉!"#$菌株孢子

化生产是淡紫拟青霉!"#$菌株应用亟待解决的问题。玉米是我国主要农作物之一，玉米秸秆除少部分用作饲料外，大部分被焚烧掉，不仅造成环境污染，而且易产生火灾等隐患。本研究的目的是：（$）用玉米秸秆生产淡紫拟青霉孢子，变废为宝，降低淡紫拟青霉产孢的生产成本，提高产孢量；（%）了解固体发酵产物（淡紫拟青霉孢子）在室温条件下贮藏的稳定性，为商品化生产提供依据。

!材料和方法

!"!

菌株来源

淡紫拟青霉!"#$菌株及其衍生菌株&%$（产孢能力较强，寄生能力未确定），由华中农业大学植物科学技术学院线虫研究室自行分离并保存。!"#

菌种的制备

将淡紫拟青霉!"#$或&%$菌株从保存试管中转接在新鲜’()（马铃薯蔗糖琼脂）平板上，

使其产生大量的孢子；再将其接到种子培养基上（玉米粉米糠于%*+恒温箱中培养两周左右，

固体培养基），接种量为$,-个孢子./湿料；混匀继续在%*+恒温箱中培养$,0后，1+冰箱保存待用。菌种孢子含量为%2,3$,4个./。!"$

玉米秸秆和玉米粉不同配比筛选

玉米秸秆和玉米粉设$51、（质量分数）以纯玉米秸秆和玉米粉$5%、$5$、%5$、15$*个配比，为对照。干料比清水为15"（质量分数），每处理1次重复。$,/干料.皿，!"%

固体发酵基本配方中碳、氮源添加量筛选

固体发酵基本配方：玉米秸秆和玉米粉配比为$5$（质量分数），水分含量",6。碳源中，：$,、尿素分别设（/.7/）：$、蔗糖分别设（/.7/）%,、!,和1,/四个浓度梯度；氮源中，%、*、$,和硫酸铵分别设（/.7/）：*、%,/五个浓度梯度，$,、%,和1,/四个浓度梯度。分别以不加外来氮

源和碳源为对照$和对照%，每处理1次重复。!"&

营养成分筛选

1

进行了组合，各处理加水含量均为*,6。其中玉米粉因子培养基成分按正交表8（4!）

（)）：$,/（)$）、（)%）、（)!）；米糠因子（9）：1/（9$）、（9%）、（9!）；玉米秸秆因子（:）：$*/%,/*/"/（:$）、（:%）、（:!）；硫酸铵因子（&）：,2$6（&$）、（&%）、（&!）。配制时，先将硫1/*/"/,2%6,2!6

酸铵溶于蒸馏水中，再与其他物料混匀。每处理1次重复。!"’

接种与培养

各物料在$%$+湿热灭菌%*;<=，冷却后采用固体种子接种。接种量为培养基湿重的$6。将菌种与培养基充分搅拌均匀后，置于%*+恒温箱中培养，待发酵完全后测产孢量。!"(

固体发酵产物在室温条件下保存不同时间孢子萌发情况

以正交试验最佳组合进行固体发酵，其产物存放室内的玻璃柜中，保存一定时间后，测定孢子的萌发率。每处理1次重复。!")

测定方法

将发酵好基质混匀，用蒸馏水（含,2%6吐温）洗!次，收集孢子悬浮液并定容。将其稀释到适宜浓度后用血球计数板测定孢子悬浮液的浓度，计算孢子含量、产孢量（个./），用琼脂平板测定孢子的萌发率。采用&>?@=’A新复极差测验进行方差分析。

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应用玉米秸秆生产淡紫拟青霉36-1 菌株孢子

中国生物防治第",卷

!结果和分析

!"#

$!#菌株在玉米秸秆和玉米粉不同配比中的产孢量

（质量比）为!"#菌株在玉米秸秆$玉米粉

%&#、"&#、#&#、#&"、#&%培养基中平均孢子含量

分别为#’(%)#*+、%’,+)#*+、(’*,)#*+、+’(+-’,()#*+个$.。而在仅有玉米秸秆的)#*+、

对照中只有少量菌丝生长，孢子产量 …… 此处隐藏：6449字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……