替米考星在绵羊体内的药代动力学研究

畜牧兽医学报,2004,35(5),560-564

ActaVeterinariaetZootechnicaSinica

替米考星在绵羊体内的药代动力学研究

张继瑜1,李建勇1,苗小楼1,周绪正1,李金善1,李宏胜1,董鹏程1,徐忠赞1,严新兴2

(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部新兽药工程重点开放实验室,兰州730050;

2.浙江海正药业股份有限公司,台州318000)

摘　要:5只健康小尾寒羊,采用静脉和皮下注射2种途径以替米考星10mg/kg体重剂量给药,进行体内药代动力学研究。动物给药后在96h内分点采血,血浆样品处理采用甲醇沉淀,离心去蛋白,调节pH值并用氯仿提取替米考星;样品测定采用苯基柱,以反向HPLC测定绵羊血清中的替米考星浓度。结果表明,绵羊静注和皮下注射替米考星的药时数据均符合二室开放模型,替米考星皮下注射和静脉给药在羊体内具有吸收和分布较迅速,消除缓慢,体内分布容积大,生物利用度较高的特点。结果对了解替米考星在绵羊体内的药动学特征以及指导临床正确用药具有重要意义。

关键词:替米考星;药代动力学;HPLC;绵羊

中图分类号:S859.79　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:0366-6964(2004)05-0560-05

　　替米考星(Tilmicosin)是一种大环内酯类动物专用抗生素,是目前最安全的抗感染药物之一[1]。在国外,替米考星被批准用于治疗肉牛和非泌乳奶牛由支原体和巴氏杆菌引起的呼吸道疾病,在猪作为饲料添加剂用于控制因胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆

[2,3]

菌引起的呼吸道疾病具有显著效果。作为试验研究,替米考星对奶牛乳房炎、绵羊和山羊等动物的胸膜肺炎的治疗也有报道,但目前还没有被批准用于绵羊[4～6]。在药动学研究方面,替米考星在奶牛、猪和山羊均有研究报道,而对绵羊的药代动力学还无系统的研究。本研究对替米考星在健康成年绵羊分别接受皮下和静脉注射单剂量替米考星(10mg/kg体重)后的体内药物动力学进行研究,考察替米考星在绵羊体内的药代动力学过程及有关常数,正确了解替米考星在羊体内的药代动力学特性,为临床应用作出正确评价。与大多数抗生素药物一样,经过发酵和半合成的替米考星在化学组成上存在顺式(cis-)和反式(trans-)二种异构体,但顺式和反式结构的生物活性差别还没有相关的研究报道。在含量控制中,一般将顺式异构体作为主要检测指标(USP标准规定达到85%以上)。

[7～9]

30±5.0kg,其中公羊3只,母羊2只,购自兰州某羊场。

1.2　药品与试剂

替米考星:浙江海正药业股份有限公司提供,含量95%,保存于4℃冰箱中。

替米考星磷酸盐:浙江海正药业股份有限公司提供,含替米考星87.9%,其中顺式-替米考星含量85%,反式-替米考星含量15%。常温避光保存。

甲醇、乙腈均为色谱级,磷酸、二丁胺、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾与磷酸钾为分析纯,均购于甘肃省化学试剂公司。1.3　仪器与色谱条件

Waters高效液相色谱仪系列;Waters510型泵,480型紫外检测器,U6K型进样阀,AST型数据处理仪,3800型打印机。Lunaphenyl-hexyl(OOG-4257-Eo)色谱柱,Luna公司产品。流动相为A∶B∶C(55∶30∶15),流速1.0mL/min,柱温30.0±0.5℃,AUFs为0.05,检测波长285nm。

流动相制备如下,流动相A:乙腈∶水(50/50),用正磷酸调整到pH值2.5。流动相B:双蒸水,用正磷酸调整到pH值2.5。流动相C:80mL1mol/LDBAP水溶液,体积调整到1000mL。

DBAP的制备方法:在700mL双蒸水中加入168mL二丁胺,然后边搅拌边缓缓加入30～50mL的正磷酸,至二丁胺完全溶解,避免加入过量的酸。冷至室温,用磷酸将pH值调整到2.5,最后定容到1　材料与方法

1.1　试验动物

成年健康小尾寒羊5只,12月龄左右,体重范围

收稿日期:2003-04-21

作者简介:张继瑜(1967-),男,甘肃庆阳人,副研究员,博士,主要从事

5期张继瑜等:替米考星在绵羊体内的药代动力学研究

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1.4　动物饲养与给药方式

试验期内,动物每d饲喂以苜蓿为主的干草,同时补充精料和盐,自由饮水,羊只饲养在自然光照的圈舍中,环境温度18～25℃。给药方式分别采用静脉和皮下注射途径,给予活性成分替米考星的换算量10mg/kg体重的剂量,静脉给药为颈静脉注射,皮下注射部位为双侧颈部皮下。两种给药途径之间间隔15d的体内药物消除期。1.5　检测方法

替米考星经不同途径给药后,分别在5、15、30分钟和1、1.5、2、3、4、5、6、8、12、24、36、48、60、72和96小时经颈静脉采血10mL,离心,精确量取血浆5mL,加入甲醇7mL,旋涡震荡1min,于3000～3500r/min离心10min,取上清液加1mol/LNaOH约10LL,调节pH值至9,然后用5mL氯仿提取2次,3500r/min离心10min,合并氯仿层,用氮气在40～50℃水浴中吹干,残渣加流动相400LL,震荡使溶解,离心过滤,-20℃保存待测。HPLC测定进样量50LL,替米考星峰值的保留时间为3.78min,洗脱时间20min。

1.6　数据统计分析

数据处理采用中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所提供的MCPKP药代动力学软件

[10]

从图1可以看出,在测定条件下,羊空白血清在TR=2.8min和2.2min左右有吸收(图1-a),而在含药血清中,替米考星的吸收峰在TR=3.78min(图1-b),二者分离度良好。2.2　线性范围和检测灵敏度

分别配制替米考星浓度为0.025、0.05、0.1、0.2、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0、10.0、15.0Lg/mL的标准血样,按样品测定方法操作,以峰高(H)对浓度(C)进行线性回归,根据浓度区段不同,得到2个回归方程:(1)C=6.21×10H-0.025,(C=0.025～1.0Lg/mL),n=7,r=0.9918;(2)C=4.27×10H+0.374(C=1.0～15.0Lg/mL),n=7,r=0.9979。

方法的最低检测浓度为0.015Lg/mL,最低检测限3ng。2.3　回收率测定

分别依照测定区段配制含替米考星0.03Lg/mL、0.1Lg/mL、0.9Lg/mL和2Lg/mL、7.5Lg/mL、13.0Lg/mL的标准血样,按照所建立的HPLC法测定,结果前3者的回收率分别为89.5%、89.1%、91.0%,后3者的回收率分别为93.1%、95.6%和92.0%。2.4　精密度试验

配制含替米考星0.1Lg/mL的标准血样共4批,每批4个样品,分别测定替米考星含量,计算批内和批间变异系数,试验结果表明批内变异系数为2.1%,批间变异系数为5.9,精密度在允许范围内。2.5　羊静注替米考星的药代动力学

10mg/kg体重单剂量替米考星静注给药后,分别在规定时间点采血取样,样品处理测定按检测方法操作。替米考星在羊血浆中的浓度-时间曲线如图2所示(曲线▲-▲)。血浆药物浓度数据经处理,选定最佳药代动力学模型为二室开放模型,药代动力学参数见表1。

2.6　羊皮下注射替米考星的药代动力学

10mg/kg体重单剂量替米考星皮下注射给药后,分别在规定时间采取血样,按样品测定方法操作。替米考星在羊血浆中的浓度-时间曲线如图2所示(曲线□-□)。血浆药物数据经处理,选定最佳药代动力学模型为二室开放模型。药代动力学参数见-5

-5

。

2　结　果

2.1

　色谱行为

图1　空白血浆和给药后血浆的HPLC色谱峰

a.空白血浆;b.含药血浆(1.0Lg/mL)

TR2.8示血浆主要吸收峰,3.78示药物吸收峰Fig.1　Representativechromatogramsof(a)black

plasma,(b)aplasmasamplefromasheep

containingtilmicosin1.0Lg/mL

TR2.8:thechromatogrampeakofcontrolplasma;TR3.

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畜　牧　兽　医　学　报35卷

3　讨　论

替米考星目前在动物的给药方式为内服和皮下注射二种途径,而不用静脉和肌肉注射途径,这主要是由于替米考星具有一定的刺激性和有时会引 …… 此处隐藏：9221字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……