培养基制备的质量控制

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1. 目的

微生物实验室主要工作是对各种微生物进行保存、复苏、培养、检测和（或）计数，所用的培养基应对样品和被测微生物都具有特异性，为了满足微生物分析过程对培养基最低要求，和保证能够获得重现性结果，确保分析结果准确、可靠，必须对培养基的制备过程进行有效的监控，从而保证结果的可信和有效。

2. 适用范围

微生物实验室所有培养基的接收、贮存和制备过程。

3. 职责

培养基管理人员：收到培养基后按要求对培养基进行接收、记录和贮存。

培养基制备人员：培养基的制备整个过程应严格按要求进行。 科室负责人：负责对培养基的订购和综合管理。

4. 培养基的接收与贮存

4.1 生产企业应提供的文件

4.1.1 培养基的独立成份、添加成分及产品编号及批号。 4.1.2 培养基使用前的PH，储存信息和有效期。

4.1.3 性能评价和所用的测试菌株，技术数据清单，质控证书，必要的安全/危险数据。

4.2 实验室检查记录

实验室收到培养基后应检查：培养基名称和批号，接收日期，有效期，包装及其完整性。

4.3 贮存

应严格按照供应商提供的贮存条件,有效期和使用方法进行培养其的保存和使用。培养基的购买应有计划，以利于存货的周转（即掌握先购先用的原则）。

4.3.1 脱水培养基及其添加成分：新购买的培养基一般为脱水的粉状或颗粒状，保存在密闭的容器中。用于菌种选择或鉴定的添加成分通常为冻干物或液体。实验室保存有效的培养基目录清单应包括的内容有：容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查（如粉末流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等）。

4.3.2商品化即用型培养基：应严格按照供应商提供的贮存条件、有效期和使用方法进行保存和使用。

4.3.3商品化的脱水合成培养基和各别成分制备的培养基：这类培养基的贮存有效期各不相同，一般无法做到统一规定。可参照不同标准中的规定执行。

培养基灭菌分装到平皿、试管或测试瓶中，不能立即使用的培养基应避光、干燥保存。 除特殊说明和标准规定，通常情况下基础培养基（如使用前入添加成分的培养基）应在4℃

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冰箱中保存不超过3个月，或在室温（20℃）下保存不超过1个月，以保证其成分不改变；不稳定选取择性物质和其它添加成分应即配即用；对发生化学反应或含有不稳定成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化。

观察培养基颜色变化，是否有蒸发、脱水情况，是否有微生物生长。当培养基发生这类变化时，应禁止使用。使用和进一步加热前，应事先将培养基放置到室温。

5. 培养基的实验室制备

5.1 概述

使用脱水培养基和其他含有有害物质（胆盐或其它选择剂）的成分时，应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明配制，如质量/体积、pH、制备条件、灭菌条件和操作步骤，并做好记录。

5.2 水

配制培养基使用蒸馏水或相同质量的水，以排除测试条件下抑制或影响微生物生长的物制。如果蒸馏水的用氯消毒的水制备的，在蒸馏前应先对氯进行中和（见GB/T6682）。盛放蒸馏水的容器最好是由中性材料制成的（如中性玻璃、聚乙烯等）。为保证蒸馏水的质量，电导率应＜10ms/m（＜100µs/cm），细菌数＜50CFU/mL，建议每月至少检测一次。

警告：采用离子交换器（去离子）生产的去离子水，微生物含量较高，这种水在过滤灭菌后仍可能带有细菌生长的抑制因子。所以配置培养基时最好不要使用这种方法生产的去离子水而应使用蒸馏水。

5.3 称量和复水

称量所需的脱水培养基（注意缓慢操作，必要时佩带口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有毒物质的培养基粉末），先加入少量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后再加入至所需的量。

5.4 溶解

脱水培养基加水后适当加热，并不停搅拌使其快速溶解，必要时，重新溶解。含琼脂的培养基在加热前应先浸泡几分钟，用各别成分制备的培养基应将不同成分分别加入适量的水中，并充分溶解，然后再加入到所需的量。

5.5 pH的测定和调整

用pH计测pH，必要时进行调整。在实验室用各别成分制备培养基，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却到25℃时，pH的变化不应超过0.2个单位。一般使用浓度约为40g/L（约1mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调整培养基的pH。 注：商品化的培养基高压灭菌后pH值可能变化很大，但采用优质蒸馏水或去离子水配配制时，灭菌前无需调节pH值。

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5.6 分装

将制配制好的培养基分装到适当的容器中，根据不同用途，容器的体积可为培养基的1倍、2倍或3倍。

5.7 灭菌

培养基和试剂应采用湿热灭菌或过滤灭菌。亮绿培养基等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，只能煮沸灭菌，煮沸后应迅速冷却，避光保存；明胶、血清、糖类等不耐高温的物质，应采用高压低温灭菌法/间歇灭菌法灭菌；有些试剂则不需灭菌，可直接使用（参见相关标准或供应商使用说明）。

5.7.1 湿热灭菌：湿热灭菌在高压锅或制备培养基的容器中进行，高压灭菌一般采用121℃灭菌15min，当培养基体积超过1000mL时，要对灭菌条件进行适当调整，但应按照标准或使用说明的规定进行。高压灭菌过程要通过放置到特定的位的热电耦或测试条进行监测，以保证灭菌的效果。

灭菌效果控制是关键，加热后采用适当的方法冷却，以防加热过度。这对于肠道菌培养基和大容器中的培养基等的灭菌十分重要。

注：大容量（＞1000mL）的培养基灭菌时可能会造成过度加热。

5.7.2 过滤灭菌：过滤灭菌可在真空负压或正压的条件下进行，使用也孔径为0.22µm的滤膜和过滤垫，过滤前先将滤膜和滤垫灭菌，过滤器于121℃灭菌15min（可以整体灭菌也可以拆卸后灭菌），灭菌后在无菌条件下组装。

注：一些滤膜上附着有蛋白质（如抗生素），为达到有效过滤，应事先将膜用无菌水润湿。

5.7.3 监测:应对经湿热或过滤灭菌的培养基进行监测,尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行监测。

5.8 添加成分的制备

制备有毒物质的添加成分（尤其是抗生素）时应小心操作（必要时在通风柜中操作），避免因粉末的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良么应；制备溶液时小心按产品使用说明书操作，不要使用过期的试剂，抗生素工作液应现用现配；批量配制的抗生素溶液分装后冷冻贮存，但解冻后的贮存溶液不能再次冷冻；厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的有关资料，也可由使用者自行测定。

6. 培养基的使用

6.1 琼脂培养基的融化

将培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高压锅中的蒸汽）使之融化。经过高压的培养基应尽量减少重加热时间，避免过度加热。培养基融化后放入47℃±2℃的恒湿

水浴锅中保温，直至使用。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4h。

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6.2 培养基的脱气

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