色谱纯度HPLC分析方法验证报告样式(2)

3.1.2.2取每个杂质溶液分别进样，记录色谱图。记录每个杂质的保留时间，用保留时间对每个杂质进行定性，结果填写在表1-1。

按照保留时间顺序，杂质C, XA, D, A, XB, XC的保留时间依次为2.218min, 5.168min, 11.402min,12.019min, 17.191min, 17.960min。它们的色谱图见KP0-000001.D，KP0-000003.D，KP0-000005.D，KP0-000006.D，KP0-000008.D，KP0-000009.D。

表1-1 各杂质的定性

3.1.3 杂质和×××的分离度测试

以重复性项下的色谱图进行评价，记录各组分的出峰顺序和保留时间，并计算相邻组分之间的分离度R，数据见表1-2

。色谱图见KP0-000014.D。 3.1.4×××加入已知杂质的分离度测试 3.1.4.1溶液制备

称取×××样品10mg，加入线性项下标准贮备溶液(10μg/ml) 2.0ml, 再加入流动相溶解并稀释至10ml，混合均匀。 3.1.4.2测定：

取该溶液进样，记录色谱图，记录各组分的出峰顺序和保留时间，计算它们的相对保留时间(RRT)（×××为1.0）和相邻组分之间的分离度R，数据见表1-3。色谱图见KP0-000026.D。

表1-2 杂质和×××分离度测试

表1-3 ×××加入已知杂质的分离度测试

3.1.6专属性评价标准

1) 溶剂对杂质的测定无明显干扰；

2）杂质A和杂质D的分离度不小于1.0；其它每个相邻组分之间的分离度R均应大于1.5； 3.1.7 验证结果及评价

溶剂对杂质的测定没有干扰，×××与相邻杂质XA和杂质D的分离度依次为21.1和13.2, 较相邻的杂质D和杂质A的分离度为1.8，杂质XB和XC的分离度为1.6，均大于1.5，表明×××与每个杂质以及每个杂质之间分离度均符合要求。方法的专属性符合验证标准。 3.2系统适用性试验

3.2.1按照×××色谱纯度分析方法进行：

3.2.2分离度：系统平衡后，取系统适用性溶液进样，记录色谱图，3-苯甲酰基苯甲酸和×××的相对保留时间依次约为0.8和1.0；计算3-苯甲酰基苯甲酸和×××的分离度。以×××峰计算色谱柱的理论塔板数N和拖尾因子T。色谱图见KP0-000039.D。

3.2.4重复性

标准溶液连续进样6次，记录色谱图，计算主峰面积的RSD。测定数据和结果见表2-1。色谱图见KP0-000040.D～KP0-000045.D。 3.2.3验证合格标准

1） 以×××峰计算色谱柱的理论塔板数N，应不少于2250； 2） ×××峰的拖尾因子T，不大于2.0；

3） 3-苯甲酰基苯甲酸和×××的分离度R至少为4； 4） 标准溶液连续进样6次，其主峰面积的RSD≤5%。 3.2.4系统适用性试验结果及评价：

在系统适用性溶液的色谱图中，3-苯甲酰基苯甲酸和×××的分离度R为13.3，大于4；以×××峰计算色谱柱的理论塔板数N为20328，大于2250；×××峰的拖尾因子T为 0.83，小于2.0；标准溶液连续进样6次，其主峰面积的RSD为0.51%，小于5%。方法的系统适用性试验符合验证标准。

表2-1 系统适用性试验数据

3.3 精密度 3.3.1 重复性

3.3.1.1以方法规定的色谱条件，取线性项下No.5线性标准溶液，连续进样6次，记录色谱图，计算各组分峰面积的平均值、标准偏差S和RSD。以RSD评价方法的重复性。数据及结果见表3-1。色谱图见KP0-000014.D～KP0-000019.D。 3.3.1.2验证合格标准：

标准溶液连续重复6次进样，各组分峰面积的相对标准偏差 RSD≤5%。 3.3.1.3重复性验证结果及评价

标准溶液重复进样6次，杂质C, 杂质XA, ×××, 杂质D, 杂质A峰面积的RSD依次为0.24%, 0.41%, 0.51%, 0.54%, 0.21%, 1.6%和0.86%, 均小于5%, 方法的重复性符合标准。 3.3.2 中间精密度

另日，由另外一个化验员，按照线性项下No.5线性标准溶液的制备方法配制相同浓度的溶液，在相同的仪器上连续进样6次，记录色谱图。计算各组分峰面积的平均值、标准偏差S和RSD，以RSD评价方法的中间精密度，数据及结果见表3-2。色谱图见KP0-000014.D～KP0-000019.D。 3.3.2.2验证合格标准：

标准溶液连续重复6次进样，各组分峰面积的相对标准偏差 RSD≤5%。 3.3.2.3中间精密度验证结果及评价

标准溶液重复进样6次，杂质C, 杂质XA, ×××, 杂质D, 杂质A峰面积的RSD依次为0.20%, 0.23%, 0.60%, 0.60%, 0.24%, 1.1%和0.49%, 均小于5%；方法的中间精密度符合标准。 3.3.3精密度的显著性评价

使用F-检验的方法，评价在精密度方面，方法的重复性和中间精密度有无显著性差异。 3.3.3.1步骤

(1) 取各组分重复性和中间精密度项下的峰面积的标准偏差S; (2) 选择显著性水平α=0.05；

(3) 从表3-1和表3-2获得峰面积的标准偏差S，确定S1和S2（S1>S2）； (4) 计算 F 值， F = S1/S2；

(5) 计算自由度 (n2-1,n1-1)=(5, 5)，n2＝n1＝6；

(6) 查阅在α=0.05，自由度为(5,5)，单侧检验的F0＝5.05； (7) 数据和结果见表3-3。 3.3.3.2验证合格标准

每个组分的F应小于F0，即表明方法的重复性和中间精密度之间无显著性差异。 3.3.3.3验证结果及评价

每个组分的F应小于F0，表明方法中间精密度和重复性之间的精密度无显著性差异。 3.3.4精密度验证结果及评价

标准溶液重复进样6次，在重复性项下，杂质C, 杂质XA, ×××, 杂质D, 杂质A, 杂质XB和杂质XC峰面积的RSD依次为0.24%, 0.41%, 0.51%, 0.54%, 0.21%, 1.6%和0.86%, 均小于5%；在中间精密度项下测得的RSD依次为0.20%, 0.23%, 0.60%, 0.60%, 0.24%, 1.1%和0.49%, 均小于5%；F-test结果表明，每个组分的F值均小于F0值5.05, 表明方法的中间精密度和重复性之间的精密度无显著性差异。方法的精密度符合验证标准。

表3-1 重复性试验数据

2

2

表3-2 中间精密度试验数据

表3-3 重复性和中间精密度有无显著性差异的评价

3.4 线性及范围 3.4.1 溶液制备 3.4.1.1标准贮备液

分别精密称取以下标准品：杂质A、杂质C、杂质D、杂质XA、杂质XB、杂质XC和×××标准品适量，分别至一个容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混合均匀，得到每个组分的标准贮备液。

每个成分的浓度均约为0.10mg/ml。（备注：为保证线性范围，浓度应充分精确，并根据含量折纯）。 3.4.1.2标准贮备溶液(a)：

分别量取每个杂质和×××的标准贮备液各5.0ml,至一个50.0ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混合均匀。每个组分的浓度均约为10μg/ml。 3.4.1.3标准溶液

分别取标准贮备溶液(a) 0.5ml, 1.0ml, 2.0ml, 4.0ml, 5.0ml, 6.0ml各至一个25.0ml容量瓶，用流动相稀释至刻度，混合均匀，得到No.1～No.6标准溶液。

每个杂质和×××的浓度范围均约为0.2～4 μg/ml，相当于杂质含量在0.02%～0.24%。 3.4.2 测定

分别取No.1～No.6标准溶液，分别进样，每个浓度连续进2次，记录色谱图至最后一个组分出峰为止。浓度、峰面积及实验结果见表4-1～表4-7。 3.4.3 线性回归

以各组分峰面积平均值对其浓度（μg/ml），使用origin 5.0软件进行线性回归，得到各组分的标准曲线，线性方程及相关系数R。线性测试数据及结果见表4-1～4-7。 3.4.4验证合格标准：

在每 …… 此处隐藏：3493字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……