同型半胱氨酸对血管内皮细胞凋亡和核因子-κB活化的影响

目的：观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞凋亡及核因子-κB(NF-κB)活化的影响,以探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制。方法：将不同浓度的Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,PI单染法检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测细胞内Bcl-2的表达及NF-κB的细胞内定位,流式细胞术检测细胞核NF-κB的表达。结果：Hcy可诱导细胞凋亡,凋亡指数随Hcy浓度增大和作用

蚌埠医学院学报 2 1年 2月第 3第 2期 01 6卷[文章编号]10—2 0 2 1 )20 1-4 002 0 (0 10 -17 0

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基础医学

同型半胱氨酸对血管内皮细胞凋亡和核因子一B活化的影响 s:周继红章，尧[要]摘目的：察同型半胱氨酸 ( e )人脐静脉内皮细胞株 E V3 4细胞凋亡及核因子一B N—B活化的影响，观 Hy对 C一0 K ( FK )以探讨 H y动脉粥样硬化的可能机制。方法：不同浓度的 Hc c致将 y与 E V3 4细胞体外共培养不同时间， I染法检测细胞凋亡， C - 0 P单 免疫组织化学染色法检测细胞内 B l c- 2的表达及 N—B的细胞内定位，式细胞术检测细胞核 N—B的表达。结果： c FK流 FK H y可诱导细胞凋亡，亡指数随 Hc度增大和作用时间的延长而逐渐升高；0 0m lLH y用 2凋 y浓 1 . mo c作/ 4h后 B l c 2表达阳性细胞的一

均数显著低于 10 5 0m o L组和对照组 ( 00 )随 He .、. m l/尸< . 1; y浓度的升高， FK N—B由细胞质转位至细胞核， o LH y作 5mm l c/用 0 5 1 2h N—B的核内表达率分别为( 6 7 2 5 )、 1. 1±1 3 )、 1 .5±17 )。结论： y可下调抗凋亡 .、、,FK 1 .6± . 5% (2 9 .8% (4 1 .4% Hc基因Bl c 2的表达而诱导细胞凋亡，存在剂量效应关系。 H y活化 N—B且呈现剂量依赖性。一且 e可 FK,

[键词]同型半胱氨酸；脉粥样硬化；亡；因子一B关动凋核 K[中国图书资料分类法分类号]Q 57 l[献标识码]A文

Efe t0 o o y t i n a p o i n c i a i n f f c f h m c s ene o po t ss a d a tv t0 o nu l a a t r K i u t r d v s ul r e do h la el c e r f c o . B n c lu e a c a n t e i lc lsZ HOU J— o g Z ih n, HANG Ya o

( . eat etfBohmir n l u r ioy B n b d a C lg,eg uA h i 3 0 0 1Dp r n o

i e sya dMoe l o g, eg uMei l ol eB n b nu 3 3; m c t ca B l c e 22 W n a dc l ol e W h n u 4 0 2 C i ) . a n nMe i l g, u uA h i 1 0, hn aC e 2 a

[ b t c]Obet e T be eteeet f o oytie H y naots n c vt no ula f tr B N—B nE V A sr t a jc v:oosr fc o hm cs n ( e )o p poi adat ao f cer a o— ( FK )i C一 i v h f e s i i n c K3 ls n i v siae h po sb e e h n s 04 cel a d n e tg t t e s il m c a im i Hc idu e aheos lr ss n y n c d t r ce o i .M ehods: t The p ptss f ECV- 4 c ls a o o i o 30 el wa s d e td b t i n Th x esin fBc一 a he lc to fNF— n c lswe e e a n d b mm u o so h mity meho etce y PIsanig. e e pr so o l2 nd t o a in o KB i el r x mi e y i n hitc e sr t d. Th x e so fNF— i c l u l a s d t ce lw yo ty.Re u t Hc idu e a po i f ECV一0 e l nd t e e pr si n o KB n el c e r wa e e td by fo c tme r n s ls: y n c d po tss o 3 4 c ls a he a ptss ide r n r a e t y c n e tai n a d r ame i po o i n x we e i c e s d wih Hc o c n r to n te t nttme. he he c lswe e te td wih 1 0 W n t el r r ae t 0. mmo/L c o 4 l H y f r2 h ur t u b ro st e c lsi x r s in o l2 wa n r a e ini c n l o a e t 0, 0 mmo/L n o to r u o s,he n m e fpo ii e n e p e so fBc - si c e s d sg f a ty

c mp r d wih 1. 5. v i l a d c n r lg o p

( P<0 ( ) I o t l r u, F K a c t yo l m, h n te e s e c b tdw t a d 1 m lL H y N— B w s . 1 .nc nr o p N— B w s o a d i c tp s a w e l r i u a i 5 n 0 m o c, F K a ) og l e n a h c lw e n e h /ta fre n o c lua u l a .Afe ic ai n wi mm o/L rnser d it el lr n c e r t r n ub to t 5 h l Hc fr0. y o 5,1, n h ur t x r s i n ae o a d 2 o s,he e p e so r t f NF— B i el K ncl

nc a w s(67 - .5%,1.1 .8% ad(4 1 ul r a 1.6 25 ) (29±I3 ) n 1.5±I7 ), set e . ocui s H ycni ueaot io C - 4 e+ .4% r pcvl C nls n: c a d c ppo s f V3 e i y o n s E 0c lst rug e ucn h x e so l2 i o e d p n e tna n r Hc a ciae NF K i a c n e ta in de n n atr e h o h rd i g te e prs in Bc一 n d s— e e d n ln e . y c n a t t— B n o c nr t— pe de tp t n. v o e

[ yw r s o cs ie a eoceoi;p poi;ula fc r a p Ke od]hmoytn;t rsl s aot sn c r at— p aB e h r s s e ok

大量流行病学调查

已证实高同型半胱氨酸

发生凋亡，但参与 Hc细胞凋亡过程的相关基因 y致及调控因子尚不明了。核因子一B( ula at . K n c rf o e cr K N—B) B, F K是一种广泛存在的转录因子，要调控主凋亡相关基因及炎症基因的表达。有研究表明， 血管平滑肌细胞中 Hc诱导炎症介质白细胞介素 _ y 6

血症 ( y eh m cs ie i, C是动脉粥样硬 h p ro oyt n m a HH Y) e化 ( teoceoi, S一种新的独立危险因素， ahrsl s A ) r s但其致病机

制还不清楚。本实验室已证实同型半胱氨酸 ( o oyt n, c )抑制离体血管内皮细胞 h m cs ie H y可 e( aclr n o ei e s V C)生长。细胞凋 vsua d t l l l, E的 e h ac l

的表达部分是通过激活 N— B通路实现的， N— FK但 F K B在 He y损伤 V C致 A E s过程中的作用尚未见报道。本研究旨在探讨 H y对 V C中凋亡相关因子 c E和 N—B活化的影响。 FK

亡是机体重要的生理过程，着维持内环境稳定的起关键作用。有学者发现， c H y可诱导离体的 V C E[稿日期]2 1 -92收 000—0

[基金项目]安徽省教育厅自然科学研究基金资助项目(0 1 J7 ) 20 I 10 ([者单位]1蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室，徽蚌作 .安埠 2 3 3;. 3 0 0 2皖南医学院，安徽芜湖 2 10 402[者简介]周继红 (9 8一)女，士，师 .作 17,硕讲[讯作者]章通尧，士研究生导师，授，究办向：瘤分子生 硕教研肿物学.

1材料与方法

1 1人脐静脉内皮细胞株 E V 3 4细胞的培养 . C一0 E V 3 4细胞购自上海细胞所， 1%新生牛血清 C一0含 0培养基购自杭州四季青公司， 4万 U L庆大霉含/