土壤拮抗放线菌的分离与筛选效果研究

资源与环境科学

现代农业科技

2 0 1 3年第 1 7期

土壤拮抗放线菌的分离与筛选效果研究刘炳源周晶(曲阜师范大学生命科学学院，山东曲阜 2 7 3 1 6 5 ) 摘要针对青海地区不同类型的土壤进行放线茵的分离、筛选。结果表明， 1 0 - 3倍土壤稀释浓度为分离放线茵的最佳土壤稀释浓度：重铬酸钾是一种高效、方便、廉价的杂茵抑制剂，共筛得 1 0 2株形态各异的放线茼，有3 2株茵分别对 9种指示茵有较强的拮抗性 . 2 6株对不 同细菌有较强抑茵活性， 6株对真菌有抑茵活性，其中第2 4号放线茵对不同的指示茵的拮抗性最好。关键词放线茵；分离；拮抗性；筛选

中图分类号

Q 9 3 9 . 1 3

文献标识码 A

文章编号 1 0 0 7— 5 7 3 9 ( 2 0 1 3 ) 1 7— 0 2 2 5— 0 2

Ef f e c t S t u d y o n I s o l a t i o n a n d S c r e e n i n g o f An t a g o n i s t i c Ac t i n o my c e t e s i n S o i l

LI U Bi n g - y u a n ZHoU J i I l g’

( C o l l e g e 0 f L i f e S c i e n c e, Q u f u N o r m a l U n i v e r s i t y, Q u f u S h a n d o n g 2 7 3 1 6 5 ) A b s t r a c t A c t i n o m y c e t e s i n d i f e r e n t t y p e s o f s o i l f r o m Q i n g h a i A r e a w e r e i s o l a t e d a n d s c r e e n e d . T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e b e s t s o i l d i l u t e dc o nc e n t r a t i o n f o r s e pa r a t i ngA c t i n o my c e s wa s 1 0 t i me s .He a v y c h r o mi c a c i d p o t ss a i u m Wa S a k i n d o f h i s h e f f i c i e n t, c o n v e n i e nt, i n e x p e n s i v e, mi x e d b a c t e ia r i n hi b i t o r s, a

nd 1 0 2 s t r a i n s A c t i n o my c e t e s wi t h di fe r e n t mo r p h o l o g y we r e s c r e e ne d, i n wh i c h 3 2 s t r a i n s h a d s t r o n g e r mi n e r a l o c o r t i c o i d

r e s i s t a n c e o n 9 i n d i e a t i o n b a c t e i r a r e s p e c t i v e l y, 2 6 s t r in a s h a d a i n h i b i t o r o n d i f e r e n t b a c t e i r a, 6 s t r in a s h a d a n t i b a e t e r i a l a c t i v i t y o n f u n g u s . t h emi n e r a l o e o r t i c o i d r e s i s t a n c e o f 2 4t h Ac t i n o my c e t e s Wa s t h e b e s t f o r d i fe r e n t i n s t r ue t i o n s .Ke y wo r d s Ac t i n o my c e t e s; i s o l a t i o n; a n t a g o n i s t i c; s c r e e n i n g

.

农用抗生素作为生物农药，以其高效、低毒、无残留等优点在农作物病虫害防治中发挥着重要作用【 1 - 2 1。放线菌是具有巨大实用价值的一类微生物，目前从微生物中发现的大约 8 0 0 O种生物活性物质中，近7 0%是由放线菌产生的嘲。

孔器等。1 . 2试验方法

采集土样一预处理一放线菌的分离一菌株纯化一琼脂块法初筛一杯碟法复筛一选取抑菌性菌株。 1 . 2 . 1土壤样品预处理。取土壤表层以下 5~ 1 0 c m处的土样。进行预处理，自然条件下风干 7 d。再用 3种不同的物理、化学等方法对样品进行预处理。

自然界中，尤其是土壤中。放线菌资源异常丰富。据统计分析， 1 g土壤中通常含有 1 0 0 0万个放线菌，因此开发土壤中的放线菌一直是研究的热点，目前已取得很大的成就。该试

验从青海省采集的土壤中分离、筛选出 1株具较强抑菌活性的放线菌 N 2 4,为

拮抗放线菌资源在无公害生物农药的研发与应用提供了一些基础数据。1材料与方法1 . 1试验材料

1 . 2 . 2制备土壤稀释液 (无菌操作)。一是称取土样 5 g,迅速倒入带玻璃珠的无菌水瓶中 (玻璃珠大约 3 0粒),振荡 3 0 m i n,使土样充分打散，即成为 1 0 - 2的土壤悬液。二是用移液枪吸取 1 0五的土壤悬液 0 . 5 m L。放入 4 . 5 m L无菌水中即为1 0 4稀释液，如此重复，可制成 l 0的稀释液 (每个稀释度换用 1个枪头，每次吸入土液后，要将枪头插入液面，吹吸 3次 )。

1 . 1 . 1供试待分离土样。曲阜师范大学实验室于 2 0 1 2年 8 月在青海省不同地区、不同生态环境中的枸杞植被根部的挑选采集了 4份土壤样品材料，并把每个标准地土壤剖面的同一层次的土样混合后立即转入无菌的塑料袋中带回实验室。

1 . 2 . 3放线菌的分离。 ( 1 )涂布。每份土样各取 1 O、 1 0、 1 0 4稀释液 1 0 0 mL, 用移液枪严格按照无菌操作要求，加入对应编号培养皿中， 然后用无菌的涂布棒在平板上将悬浮液轻轻涂布均匀闸。

1 . 1 . 2供试菌株。金黄色葡萄球菌、产气杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、大肠杆菌、青霉、黑曲霉、木霉、根霉均由曲阜师范大学实验室保存。1 . 1 . 3供试培养基及试剂。高氏一号培养基：用于菌株分离、培养性状观察及保藏。马铃薯葡萄糖琼脂 ( P D A)培养基

( 2 )平板划线分离微生物。使用接种环，从待纯化的菌落或待分离的斜面菌种中沾取少量菌样，在相应培养基平

板中划线分离，目的是获得单个菌落。( 3 )纯化。从培养后的第 3天起，根据菌落形态、气生菌丝特点等挑选放线菌单菌落，将生长成熟的菌落及时用无菌接种针挑取到高氏一号培养基斜面，培养 7~ 1 4 d后检查。 同一土壤样品在不同培养基上分离到的不同放线菌菌株统一

于 1 2 0 o C高压灭菌 3 0 m i n,放置备用，用于拮抗性测定和培养性状观察。 L B培养基：蛋白胨 1 0

g,酵母粉 5 g,氯化钠 1 0g,蒸馏水 1 0 0 0 mL, p H值 7 . 0,琼脂 1 . 5%。

1 . 1 . 4仪器及设备。主要有 w 2 0 2 B升降恒温水浴锅、高压灭菌锅、 S W— C J一 2 F D洁净工作台、血球计数板、 p H试纸、打基金项目 国家级大学生创新创业训练计划项目( 2 0 1 2 1 0 4 4 6 0 0 7 );山东省自然科学基金 ( Z R2 0 1 0 CL O I 4 );山东省高等学校科技计划项目( J I 2 L E 0 2):曲阜师范大学青年基金 ( X J 2 0 1 1 0 7和)【 J 2 O 1 0 o 1 )。 通讯作者

编号后。在4 o C冰箱暂时斜面保存。

1 . 2 . 4抑菌活性测定。每种拮抗菌都有自己的抗菌谱。抗菌谱的测定可以为拮抗菌的使用范围提供试验依据。选用金黄色葡萄球菌、产气杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、大肠杆菌、青霉、黑曲霉、木霉、根霉 9种菌作为检定菌，采用传统的琼脂块法进行初筛，以杯碟法进行复筛，来筛选对金黄色葡萄球菌等 9种指示菌具拮抗活性的放线菌，记录其2 2 5

收稿日期

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