根癌农杆菌介导的水稻两用不育系培矮64S遗传转化体系的建立

根癌农杆菌介导的水稻两用不育系培矮64S遗传转化体系的建立

第3 O卷第 3期20 0 9年 5月

农业现代化研究RE EARC OF AGRI UL URAL MODERNI AT ON S H C T Z I

V0 .O No. 13 3 M a .20 v 09

根癌农杆菌介导的水稻两用不育系培矮 6 S遗传转化体系的建立 4肖媛 t,,李落叶徐孟亮 1,崔延春夏新界 ,,, 2 3,(. 1中国科学院亚热带农业生态研究所，亚热带农业生态过程重点实验室，湖南长沙 4 0 2; 1 15 2中国科学院研究生院， .北京 104;. 009 3湖南师范大学生命科学院，湖南长沙 4 0 8 ) 10 1摘要：以水稻两用不育系培矮 6 S熟胚为外植体，: 4成以不同组合培养基为诱导和继代培养基，建立了适合水稻培矮 6 S转化的 4 高效再生体系，并通过农杆菌 E A 0介导，大肠杆菌 c基因转入培矮 6 S获得再生植株。结果表明， ND为合适的愈伤 H 15将 J 4, J。, 0组织诱导培养基，导率达 5 .%;诱 6 4通过潮霉素筛选后， 4获得的抗性愈伤组织分化率为 7 .%, 3 8经分化，得 1 3 0获 3株再生植株； 随机挑选 6 7株再生植株经 P R检测，中 4株检测到目的条带， C其 6阳性检出率占 6 .%; P R阳性植株进行荧光定量实时 86对 C 6 P R分析， C结果表明 c基因能在转基因植株中表达。通过对 T代 P R分析， J . C得到目的条带，明 c基因能在转基因后代稳定表 J遗传。 关键词：水稻；培矮 6 5成熟胚； 4;根癌农杆菌；转化体系；组织培养中图分类号：5】 s 1文献标识码： B文章编号：0 0 0 7 (0 90一 34 o 10— 2 520 )3 o 6一 5

Esa l h e to r b c e i - e i t d Tr n f r a i n S se f t bi m n f s Ag o a tr mn M d a e a s o m to y t m o Th r o S n i v n cM a eS e i c ia 4 e m - e t e Ge i l t r l Ri ePe i S s i e 6

XI u n2 I u - e) UMe g1 n, UI nc u XI i i A0Y a tL oY 1 n-i C - h n, AX州 e, L X a Ya( . yL b rtr r r -c lgc l rc se u to ia gO I s tt f u to ia

r utr, 1 Ke a oaoyf oe oo ia o e ssi S brpc l o Ag P n Re in, n tueo S brp c l i l e i Ag c uChn s a e f ce c s C a g h, n n 4 0 2,Ch n; Gr d aeUn v r i f h n s a e f i e e c d my o S in e。 h n s a Hu a 1 1 5 i a 2. a u t ie st o C i e eAc d my o y

Sine, e ig10 4, hn; . i c n e ol eH n nNomaUnvri, h n sa H nn4 0 8, hn ) cecsB in 0 0 9 C ia 3Lf S i c lg, u a r l ies C agh, u a 10 1C ia j e e C e y t A s a t i e c n ee eao ytm fr e pat frgn t rnfr a o a eeo e ho g bt c:A h曲 f i trgn rt n ss r i e i e o c l s o e ei t so t n w s dv l d truh i n c a m i po t z g c l r d a. e tr mb y so e’ i 4 r s d a x l t . e ec o e r m c i wa p i i u t eme i wh n mau e e r o f i a S wee u e s e p a s CJ g n l n d fo E o l s mi n u P 6 n s c e su l e ie e t e’ i6 S t r u h t e Ag o a tru me it d me h d n tb e t n g n c p a t r u c sf l d l r d i o P i a 4 h o g h r b c e im- d ae t o,a d s l r s e i l n swe e y v n a a o t i e . h t f al si d c o a h d 5 .4 u i gJNl st ei d c in me i m. t t l f 1 3 h g o cn ba d T er eo l u t n r c e 6 4% sn 0 D3 n u t d u A a 3 y r my i n a c u n i e a h o o or s t n ln swe e o t i e t g n r t n r t f 3 0% . g o p o 6 f h m r h s n rn o y f rP e i a t a t r b an d wi ar e e a o e o 7 . 8 A r u f 7

o t e we ec o e a d ml CR s p h e i a o

n l i a d4 r oiv e e 6 . aa s, n 6weep siefr egn (86% )Q at t eR -C a s hwe a eepes no ys t o t h 6 . u i i TP R a l i so dt t h x rs o f n tv a n ys h t ie o e o s C1 g n a s e i ie p a t.P R ay i fTl ln s s o d t a e it g a e e e c u d b x g n u e e i t n g n c r l s C a l ss o a t h we tt n e r t d C1 g n o l e n r c n n p h h s a i h rtd t dl i e e . e y n i

Ke r s r e P i a 4; tr mb y; r b ce i m ea i n;r n f r a i ns se t s ec l r y wo d:i; e’ i S ma u ee r o Ag o a tru t c 6 m u f ce s t so a m t t m; s u u t e o y i u

水稻是我国种植面积最大的粮食作物，随着两系法杂交稻研究的成功，以培矮 6S为母本配制的两系杂交稻“ 4两优培九”已在广大中籼稻区推广应用。培矮 6 S是国家杂交水 4稻技术工程研究中心选育的育性转换临界温度较低的两用

1材料与方法11试验材料 .

外植体为培矮 6 S成熟种子， 4由湖南师范大学生命科学院提供。根癌农杆菌菌株为 E 1 5为本实验室保存。质粒 HA 0,为 p O A l0一 1该质粒 T D A区结构如图 1其中含有 C s c 30 C, -N, c基因(源于大肠杆菌 ) J来和潮霉素磷酸转移酶基因(p) h t。

核不育系。该不育系 19年通过了湖南省技术鉴定和“ 6” 91 8 3课题全国联合鉴定，是全国第一个有实用价值的籼型两用不育系。其具有制种安全、配组自由、杂种优势强等优良性状， 在育种工作中得到了广泛的应用。以培矮 6 S 4为受体进行根癌农杆菌介导转化近年来已有相关报道【,其成熟胚愈伤 l但 I

组织诱导困难、转化率低、重复性差仍是主要问题，限因此制了对其进行遗传转化的研究。本试验通过对诱导、继代、分化培养基的改进，建立了培矮 6 S高效再生系统， 4并从共培养、

筛选培养、预分化等步骤建立培矮 6 S成熟胚根癌农杆 4菌介导转化体系，为开展水稻功能基因组学研究和获得高产、高抗品种奠定了基础。

图 1植物表达载体 p COs c 0 CI T D A l 0一的— NA区 3 12培养基 .

在培矮 6 S 4组织培养和转化过程中使用的培养基如下： 诱导培养基——J: 0 MS盐分和维生素吼谷胺酰氨 05/++ . L g蔗糖 3 ./+琼脂粉 8#,H 5; B: 6 00 L g . L p . N N大量盐分 I 5 5 8刮微+B量盐分+N铁盐+B维生素+脯氨酸 0 g+水解酪蛋白 ./ 5L

基金项目：中国科学院“百人计划”目(项编号： 2 o 2 o 2 O )中国科学院亚热带农业生态研究所青年人才领域前沿项目( 0 O4o693; 2编号： A X I C— S L QY Q 0 0 ) Y— N- 7 6 o作者简介：媛(9 5 )女，肖 1 8一，湖南郴州人，硕士研究生，研究方向：物耐逆镜分子生物学；作通讯作者：夏新界，研究员，博士生导师。 收稿日期： 0— 2 2;回日期：0 9 0— 2 2 9 0—4修 0 20— 4 2

根癌农杆菌介导的水稻两用不育系培矮64S遗传转化体系的建立

第 3期

肖媛等：根癌农杆菌介导的水稻两用不育系培矮 6 S遗传转化体系的建立 4

35 6

O3/, A01 g+蔗糖 3 ./+琼脂粉 8 g,H58 .g+B .m/ t L 35 L g ./ p .; SL

养基表面铺一层用液体共培养培养基浸湿的灭菌滤纸，2— 6C暗培养 3。 5 2￣下 d

继代培养基一

JM, S大量盐分+1倍 B微量盐分+: O

J铁盐( eO"H04 ./、 aE T 5 m/ ) L维生 3 F S 47 2 1 mg N 2D A5 . gL+D 8 L 9

() 4抗性愈伤组织的筛选。 d后， 3将共培养的愈伤组织转入灭菌三角瓶，灭菌水冲洗 5次至液体不浑浊，再用加有

素(甘氨酸 2 m/、 . gL盐酸硫胺素 1 mg、 0 ./盐酸吡哆醇 1 mg 0 L ./ 0 L、烟酸 1 m/、醇 10 mg ) . gL肌 0 0 ./+谷胺酰氨 0 g+脯氨酸 0 0 L ./ 3L . 5/+24 D25 gL芽糖 3 .g+脂粉 85/,H58 g L,一 ./ …… 此处隐藏：15312字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……