检验方法学验证标准操作规程

1.0 目的

1.1 确立海南国瑞制药有限公司方法学验证标准操作规程，使方法学验证规范化。 2.0 范围

2.1 本标准适用于新的检验方法、检验方法变更的相应检测要求。

2.2 本标准适用于采用《中国药典》及其他法定标准未收载的检验方法、法规规定的其他需要验证的检验方法的相应检测要求。 2.3 清洁验证方法的验证。 3.0 职责

3.1 QC负责对适用范围内的分析方法进行验证； 3.2 质量管理部负责监督本规程的实施； 4.0 定义

4.1 用户需求（URS）：使用方根据使用目的、环境、用途等，对制药机械的性能、技术、使用、服务等提出的要求。

4.2 准确度：准确度系指该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。一般以回收率（%）表 示。

4.3 精密度：精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般以偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

4.4 专属性：专属性系在可能其它成分（如杂质、降解物、辅料等）存在的条件下，采用的方法能正确测定待测物的特性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充 4.5 检出限：检出限是限度试验的参数，指试样中被测物能被检测出的最低量。定量分析的检出限必须经过分析适量的在检出限附近的样品或分析按检出限条件配制的 样品的方法进行验证。

4.6 定量限：定量限系指样品中被测物能被定量测定的最低值，其结果应具有一定的准确度和精密度。定量分析的定量限必须经过分析适量的在定量限附近的样品或分析按定量限条件配制的样品的方法进行验证。

4.7 线性：线性系指在设计的范围内，测试结果与被测物浓度呈正比关系的程度。 4.8 范围：范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

4.9 稳定性：稳定性系指在正常实验条件下，供试品或对照品溶液在分析过程中的稳定程度。

4.10 耐用性：耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果和方法提供常规检查依据不受影响的承受程度。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。

4.11 取样效率：取样效率仅用于设备清洁验证时所用分析方法的验证，系指用棉签或特定溶剂从设备表面获取的被测物的量与设备表面被测物的实际含量接近的程度。一般以回收率（％）表示。 5.0 规程 5.1 验证目的

5.1.1证明采用的方法适合相应检测要求。 5.2 验证原则

5.2.1 通常情况下，分析方法需要进行方法验证。对于仅需按照实验室日常测试操作步骤测定的检验项目不需要进行验证，如外观、崩解时限、密度、重量、PH值、灰分、装量等。

5.2.2 方法验证的内容应根据检验项目的要求，结合所采用分析方法的特点确认。 5.2.3 同一分析方法用于不同的检验项目会有不同的验证要求。 5.3 验证程序 5.3.1 综述

5.3.1.1无论是新方法的开发还是对原有方法的修订，都意味着变更，都需要有针对性地进行实验室验证，以证实该变更的合理性和必要性，即证明该方法能够达到检验的预先目的。

5.3.1.2当引入的分析方法没有任何变更，可直接在实验室全面实施时，虽然该方法已经进行过验证，但由于本地实验室的各种客观条件（如仪器、试剂、外界温湿度变化等）可能与原方法提供地不同，检验员对检验方法及操作标准的理解和认知程度也可能存在差异， 这些原因均可能造成检验偏差的产生，故应在使用前对所引入方法进行必要的转移或确认，以确保方法可以在本地无误实施。

5.3.1.3各国药典或行业法规指定的检验方法，可视为已经过验证，但需参考方法确认进行药典或法规方法的引进确认。

5.3.1.4若原方法已经过验证，则只需依据原方法的验证报告进行方法转移，不再进行全面完整的验证；对以往老产品的分析方法，如原厂无力或无法进行方法转移，可用方法确认替代。

5.3.1.5由于物理量的检验（如pH、粘度、相对密度、颜色等）通常只是纯粹的测量，其基本理论已经过多方验证，所以无需再验证、确认或转移。但必须保证测定值在所使用仪器量程范围内，仪器必须定期校验且校验结果符合要求。 5.3.2人员及设备的要求

5.3.2.1人员应有相应的教育背景，接受过方法验证的系统培训，具备丰富的检验知识及熟练的 检验技能。

5.3.2.2设备应定期校验且校验结果符合要求。 5.4 验证方案 5.4.1方案的确定

5.4.1.1所有自行开发的分析方法或对原方法进行的变更，均需进行完整全面的验证。对于HPLC、GC、IR等测定方法，还应进行系统适应性测试，系统适应性测试应满足该方法适应性项下各项要求。 5.4.1.2验证的数据要求

视检验方法的不同特点，对验证数据的要求也不同，有的要求得到精确的检验结果，也有的要求对方法的属性进行主观评价。考虑到这些差异，在提出方法验证的数据要求时，只能具体问题具体分析，就不同的方法给出不同的验证方案。表1给出了常见分析方法所涉及的验证数据要求：

表 1.验证内容和数据要求

Ⅱ类：测量药品中杂质或成品药中降解化合物的分析方法，包括定量测定和限度试验。

Ⅲ类：测量药品性能特性（如溶点、旋光度）的分析方法。 Ⅳ类：鉴别反应。 5.4.1.3分析方法的有效性

分析方法的有效性只能在实验室中确认，所以圆满完成此类研究的文件也是判定方法是否适用于其用途的基本依据之一。现行的药典方法也不例外，同样也必须在实际使用条件下证明方法的适用性。 5.4.2预验证

预验证系指在正式验证前进行的实验，目的是收集证据，以初步证实该检验方法 可以达到预期要求。预验证主要用于自行开发的分析方法实验，对于引进的分析方法，可参照原供户方法验证报告直接进行验证。自行开发的分析方法通常要经历三个步骤：

① 参照文献设计方法，此时可能有不只一种方案或设想； ② 进行预验证，优化筛选实验条件，制订验证草案；

③ 方法一旦初步确定，根据草案进行正式验证，提交验证报告，完成检验方法评审，决定这一方法是否可用。

一个检验方法的开发要获得成功，预验证中最重要的内容就是该方法的专属性及准确度测定（详情参见后续介绍）。完成这两项工作后，须进行评审。如满足要求，可进行简单的线性和范围实验，以确定方法最终验证的范围，此时根据“6.3 验证方案的确定”来判断方法类型，确定验证方案，制订验证草案，然后严格遵循验证草案实施验证；如不满足要求，则应重新设计检验方法后再次进行预验证。 5.5验证操作程序及要求 5.5.1准确度

5.5.1.1方法①：在可得到空白样品的前提下，称取一定量的空白样品（相当于方法要求的标准称样量减去等量供试品中被测物量），在规定的范围内，精密加入已知量被测物对照品， 制备3个不同浓度的供试品溶液（通常为范围的上、下限及供试品的标示量），每个浓度平行两份，每份测定2次，计算回收率及相对标准偏差，即得。本法为推荐使用方法。

5.5.1.2方法②：在空白样品无法得到时，可使用标准加入法。称取标准量的样品，在规定范围内，精密加入已知量被测物对照品，制备3个不同浓度的混合标样（通常为范围的上、下限及供试品的标示量；对于不高于标示量的浓度，可在加入被测物对照品后进行稀释），每个浓度平行制备两份，每份测定两次，计算混合标样与供试品样品差值的回收率及相对标准偏差，即得。准确度若由3名不同经验的检验员在3台不同型号仪器上分别进行验证，并注意尽可能 使用不同供户、不同批号的试剂，则将其数据汇，总即可用于评价通用性。 5.5.2精密度