WATERS液相色谱培训

WATERS液相色谱培训_基础知识

液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材

WATERS液相色谱培训_基础知识

常见的分离方式蒸馏 离心 电泳 过滤 超滤

色谱

WATERS液相色谱培训_基础知识

色谱法的分类色谱液相色谱柱色谱 纸色谱 薄层色谱高效液相色谱 HPLC

气相色谱

WATERS液相色谱培训_基础知识

HPLC分离的机理 HPLC分离的机理分离是一 个物理的 过程。

WATERS液相色谱培训_基础知识

典型的仪器配置色谱泵及控制器 数据处理及控制

色谱柱

检测器W aters 486

进样器

WATERS液相色谱培训_基础知识

液相色谱的应用( 液相色谱的应用(一)“分析型液相色谱” 定性及定量分析灵敏度的要求 样品的复杂性 样品量的要求 精度及准确度的要求 容易使用

WATERS液相色谱培训_基础知识

液相色谱的应用( 液相色谱的应用(二)“制备型液相色谱” 分离及纯化化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性

WATERS液相色谱培训_基础知识

开发液相色谱方法问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率?

WATERS液相色谱培训_基础知识

什么是色谱的分辨率？ 什么是色谱的分辨率？分辨率的公式：

R=

V2 V1 1 (W2 + W1 ) 2

WATERS液相色谱培训_基础知识

影响分辨率的因素：K’, 影响分辨率的因素：K’,α,N分辨率的方程∶ k α 1 N R= k + 1 α 4 k' 是容量因子，表达了样品与柱填料的作用强弱。 α 是选择性系数，描述两化合物分离的好 坏程度。是化学因素。 N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽 程度。

WATERS液相色谱培训_基础知识

色谱柱的柱效 N理论塔板数计算公式：

V1 N =σ W W Wtan Wh W3σ W4σ W5σ σ 16 5.54 9 16 25 方法 切线法 半峰高 3σ 4σ 5σ

2

WATERS液相色谱培训_基础知识

用“切线”法计算柱效 切线” 18.70 N = 16 4σ 0.80 2V = 16.63 R

2 16.63 = 16 N 4σ 0.68 = 9569 plates

= 8742 platesV = 18.70 R

Inject

不好的色 谱柱的柱效反 而比好色谱柱 的要高，因为 其拖尾部分测 不出来W = 0.68

W = 0.80

WATERS液相色谱培训_基础知识

用“5σ”法计算柱效 18.70 N5 = 25 1.03 2

= 8240 platesV = 18.70 R

V = 16.63 R

16.63 N5 σ = 25 1.44

2

= 3334 plates

4.4% heightW = 1.03

4.4% height

W = 1.44

Good Column

Bad Column

WATERS液相色谱培训_基础知识

提高柱效的方法色谱柱本身减小填料的颗粒度 找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度 降低溶剂的粘度 增加柱长

WATERS液相色谱培训_基础知识

其他影响柱效的因素柱外效应连接管路 进样器、检测器

进样体积 进样量

WATERS液相色谱培训_基础知识

容量因子 k'与峰高的关系 与R的关系

改变k'值的方法∶调节流动相的极性、pH、离子强度等 梯度淋洗