(人教版)生物必修二：3-3《DNA的复制》备课参考

●备课资料

1.离心技术

悬浮在液体中颗粒的运动速度取决于：

①应用力——液相中的颗粒处在一支平稳的试管内，会受到地球重力的作用而运动。 ②固液相的密度差——密度小于液相的颗粒悬浮在上面，密度大于液相的颗粒则沉降下来。

③颗粒的大小与形状。

④介质的黏滞度。

就大多数生物颗粒（细胞、细胞器或分子）而言，受重力作用的悬浮或沉降的速度太慢，

－2就无法应用于物质速度（g＝9.80 m·s）的倍数的分离。所以常使用离心机对物质进行分离。

离心机是一种通过使样品绕离心转轴的中心旋转而在其上产生一个远大于地球重力的仪器。不同大小、形状和密度的颗粒会以不同的速度沉降。颗粒的沉降速度取决于离心机的转速及颗粒与中心轴的距离。

2.离心分离常见的一些方法

（一）差速沉降（沉淀）法

将一混合悬浮液以一定的RCF（RCF又称为相对离心力，RCF取决于转子的转数和旋转半径），离心一定的时间后，混合物将会被分为沉淀和上清液两部分。这种方法被广泛应用于从细胞匀浆中分离细胞器。

（二）密度梯度离心法

下列技术使用了密度梯度，即离心管中的溶液从管顶到管底密度逐渐增加。

①差速区带离心法。将样品置于平缓的预制备的密度梯度介质上，进行离心，较大的颗粒将比较小的颗粒更快地沉降，通过梯度介质，形成几个明显的区带（条带）。这种方法有时间限制，在任一区带到达管底之前必须停止离心。

②等密度离心法。这种技术根据其浮力密度的不同分离物质。几种物质可通过离心法形成密度梯度（如蔗糖、CsCl等）。样品与适当的介质混合后离心——各种颗粒在与其等密度的介质带处形成沉降区带。这种方法要求介质梯度应有一定的陡度，要有足够的离心时间形成梯度颗粒的再分配，进一步离心对其不会有影响。

使用一根细的巴氏滴管或带有细长针头的注射器可收集一个密度梯度内的条带。另一种方法可将试管刺穿，将内含物分段逐滴收集到几个管中。需要更精确的研究时，可以再进行更精确的分离。